茯苓菌種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和種質(zhì)資源研究.pdf

1、優(yōu)良純化的菌種,是茯苓栽培成功的根本保證,其直接影響茯苓的產(chǎn)品質(zhì)量和栽培產(chǎn)量,繼而影響栽培者的經(jīng)濟(jì)效益[3]。
　　 近年來(lái)對(duì)菌種的研究投入不足,出現(xiàn)了滯后于生產(chǎn)的局面。由于育種工作的滯后,國(guó)內(nèi)各地以相互引種替代新品種,在產(chǎn)品名稱(chēng)上,商業(yè)名稱(chēng)、學(xué)名和俗名上的混淆和張冠李戴現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生,同種異名現(xiàn)象較多,隨意起名編號(hào)更為普遍,如從異地引進(jìn)的菌種,隨意編號(hào),以掩蓋真實(shí)來(lái)源和編號(hào)造成菌種混亂。因此,迫切需要一種操作性強(qiáng)、能準(zhǔn)確鑒定食(

2、藥)用菌菌種的新方法。
　　 同時(shí),加快建立包括蛋白質(zhì)和DNA指紋在內(nèi)的茯苓種質(zhì)資源信息庫(kù)具有更加現(xiàn)實(shí)的意義。
　　 本課題根據(jù)茯苓各級(jí)菌種的制備及生長(zhǎng)條件來(lái)確定茯苓各級(jí)菌種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)茯苓菌株培養(yǎng)基的篩選確定茯苓最適宜生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。同時(shí),采用酯酶同工酶技術(shù)和ISSR分子標(biāo)記技術(shù),對(duì)我國(guó)茯苓栽培菌株及部分野生菌株的種質(zhì)特征和遺傳多樣性進(jìn)行了分析。主要研究結(jié)果如下:
　　 一、茯苓菌種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)規(guī)程研究

3、r>　　 通過(guò)拮抗實(shí)驗(yàn)表明:其中部分菌株之間表現(xiàn)出十分明顯的拮抗現(xiàn)象,例如麻城——靖28、P0——ACCC50864等,說(shuō)明其遺傳系統(tǒng)存在差異;同時(shí)部分菌株間拮抗現(xiàn)象不明顯,例如:P0——靖28等,說(shuō)明其遺傳差異較小,可能屬同物異名。
　　 觀察茯苓菌絲生長(zhǎng)來(lái)確定茯苓的生長(zhǎng)速度及萌發(fā)定植能力:在PDA培養(yǎng)基上,在適溫(24℃±1℃)時(shí),萌發(fā)定植時(shí)間為1～2d,長(zhǎng)滿(mǎn)試管斜面的時(shí)間為5～8d。在松木屑77％,麥麩或米糠20%,糖2

4、%,石膏1%組成的培養(yǎng)基上,25～30℃溫度下,茵絲長(zhǎng)滿(mǎn)菌袋一般為15～30d。
　　 二、茯苓菌株培養(yǎng)基的篩選研究
　　 對(duì)茯苓菌株培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,包括固體和液體培養(yǎng)基的比較,發(fā)現(xiàn)最適合的固體培養(yǎng)基為普通培養(yǎng)基,液體培養(yǎng)基為麥芽糖培養(yǎng)基。
　　 三、茯苓菌株的酯酶同工酶研究
　　 取不同來(lái)源的茯苓菌株30個(gè)作為供試菌株進(jìn)行酯酶同工酶分析,共檢測(cè)到211條酯酶同工酶譜帶,每個(gè)菌株所具有的酶帶數(shù)為6-11條

5、不等,多數(shù)為6條。30個(gè)供試菌株共有14種酶譜類(lèi)型,其中部分菌株譜帶相同。聚類(lèi)分析表明:當(dāng)遺傳相似水平為80%時(shí),供試的30個(gè)茯苓菌株可分為八類(lèi)。第一類(lèi):鄂1、福建006;第二類(lèi):麻城、ZJ、同仁堂、Z(Z)、50864、P0、86、靖28、F6、A10、大別山、9、10、14、Y1;第三類(lèi):5.78;第四類(lèi):茯苓28;第五類(lèi):L;第六類(lèi):YN、茯苓5號(hào)、W、S1、50876、DB;第七類(lèi):GD、901、GZ;第八類(lèi):ZL.部分菌株相似

6、系數(shù)為1,說(shuō)明它們親緣關(guān)系近。
　　 四、ISSR分子標(biāo)記在茯苓菌株遺傳多樣性研究中的應(yīng)用
　　 采用不同來(lái)源的3個(gè)茯苓菌株對(duì)30個(gè)ISSR引物進(jìn)行篩選,選擇擴(kuò)增穩(wěn)定、多態(tài)性較好的10個(gè)引物用于ISSR分析。在篩選退火溫度的基礎(chǔ)上,用10條引物對(duì)30個(gè)茯苓菌株進(jìn)行ISSR指紋圖譜分析,10個(gè)引物共擴(kuò)增出110條DNA帶,其中具有多態(tài)性帶70條,占總帶數(shù)的64%,平均每個(gè)引物擴(kuò)增出7條帶。從聚類(lèi)分析結(jié)果可以看出,在86%水