茯苓菌種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和種質(zhì)資源研究.pdf

1、優(yōu)良純化的菌種,是茯苓栽培成功的根本保證,其直接影響茯苓的產(chǎn)品質(zhì)量和栽培產(chǎn)量,繼而影響栽培者的經(jīng)濟效益[3]。
　　 近年來對菌種的研究投入不足,出現(xiàn)了滯后于生產(chǎn)的局面。由于育種工作的滯后,國內(nèi)各地以相互引種替代新品種,在產(chǎn)品名稱上,商業(yè)名稱、學(xué)名和俗名上的混淆和張冠李戴現(xiàn)象時有發(fā)生,同種異名現(xiàn)象較多,隨意起名編號更為普遍,如從異地引進的菌種,隨意編號,以掩蓋真實來源和編號造成菌種混亂。因此,迫切需要一種操作性強、能準(zhǔn)確鑒定食(

2、藥)用菌菌種的新方法。
　　 同時,加快建立包括蛋白質(zhì)和DNA指紋在內(nèi)的茯苓種質(zhì)資源信息庫具有更加現(xiàn)實的意義。
　　 本課題根據(jù)茯苓各級菌種的制備及生長條件來確定茯苓各級菌種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。對茯苓菌株培養(yǎng)基的篩選確定茯苓最適宜生長的培養(yǎng)基。同時,采用酯酶同工酶技術(shù)和ISSR分子標(biāo)記技術(shù),對我國茯苓栽培菌株及部分野生菌株的種質(zhì)特征和遺傳多樣性進行了分析。主要研究結(jié)果如下:
　　 一、茯苓菌種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢驗規(guī)程研究

3、r>　　 通過拮抗實驗表明:其中部分菌株之間表現(xiàn)出十分明顯的拮抗現(xiàn)象,例如麻城——靖28、P0——ACCC50864等,說明其遺傳系統(tǒng)存在差異;同時部分菌株間拮抗現(xiàn)象不明顯,例如:P0——靖28等,說明其遺傳差異較小,可能屬同物異名。
　　 觀察茯苓菌絲生長來確定茯苓的生長速度及萌發(fā)定植能力:在PDA培養(yǎng)基上,在適溫(24℃±1℃)時,萌發(fā)定植時間為1～2d,長滿試管斜面的時間為5～8d。在松木屑77％,麥麩或米糠20%,糖2

4、%,石膏1%組成的培養(yǎng)基上,25～30℃溫度下,茵絲長滿菌袋一般為15～30d。
　　 二、茯苓菌株培養(yǎng)基的篩選研究
　　 對茯苓菌株培養(yǎng)基進行篩選,包括固體和液體培養(yǎng)基的比較,發(fā)現(xiàn)最適合的固體培養(yǎng)基為普通培養(yǎng)基,液體培養(yǎng)基為麥芽糖培養(yǎng)基。
　　 三、茯苓菌株的酯酶同工酶研究
　　 取不同來源的茯苓菌株30個作為供試菌株進行酯酶同工酶分析,共檢測到211條酯酶同工酶譜帶,每個菌株所具有的酶帶數(shù)為6-11條

5、不等,多數(shù)為6條。30個供試菌株共有14種酶譜類型,其中部分菌株譜帶相同。聚類分析表明:當(dāng)遺傳相似水平為80%時,供試的30個茯苓菌株可分為八類。第一類:鄂1、福建006;第二類:麻城、ZJ、同仁堂、Z(Z)、50864、P0、86、靖28、F6、A10、大別山、9、10、14、Y1;第三類:5.78;第四類:茯苓28;第五類:L;第六類:YN、茯苓5號、W、S1、50876、DB;第七類:GD、901、GZ;第八類:ZL.部分菌株相似

6、系數(shù)為1,說明它們親緣關(guān)系近。
　　 四、ISSR分子標(biāo)記在茯苓菌株遺傳多樣性研究中的應(yīng)用
　　 采用不同來源的3個茯苓菌株對30個ISSR引物進行篩選,選擇擴增穩(wěn)定、多態(tài)性較好的10個引物用于ISSR分析。在篩選退火溫度的基礎(chǔ)上,用10條引物對30個茯苓菌株進行ISSR指紋圖譜分析,10個引物共擴增出110條DNA帶,其中具有多態(tài)性帶70條,占總帶數(shù)的64%,平均每個引物擴增出7條帶。從聚類分析結(jié)果可以看出,在86%水