南海鱸形目魚(yú)類(lèi)寄生異尖線蟲(chóng)幼蟲(chóng)的分子鑒定及親緣關(guān)系分析.pdf

1、作者首次對(duì)采自我國(guó)南海鱸形目魚(yú)類(lèi)體內(nèi)寄生的異尖科線蟲(chóng)幼蟲(chóng)進(jìn)行了分子分類(lèi)學(xué)鑒定，從410尾隸屬于78種魚(yú)體內(nèi)共采集到2396條異尖科線蟲(chóng)幼蟲(chóng)（異尖屬的除外），結(jié)合形態(tài)學(xué)分類(lèi)方法和分子生物學(xué)方法對(duì)南海魚(yú)類(lèi)寄生線蟲(chóng)進(jìn)行了調(diào)查研究。根據(jù)形態(tài)觀察和參數(shù)測(cè)量對(duì)線蟲(chóng)幼蟲(chóng)進(jìn)行初步分類(lèi)，從每種類(lèi)型中挑選出代表性樣品，運(yùn)用保守引物擴(kuò)增單條蟲(chóng)體的rDNA內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS區(qū)），對(duì)PCR產(chǎn)物分別用限制性?xún)?nèi)切酶TaqI和RsaI進(jìn)行酶切。
　　 結(jié)合P

2、CR-RFLP技術(shù)，依據(jù)酶切片段長(zhǎng)度的多態(tài)性，部分樣品測(cè)定的序列及形態(tài)特征，得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示南海鱸形目魚(yú)類(lèi)寄生異尖科線蟲(chóng)幼蟲(chóng)（異尖屬的除外）共有6種:Raphidascarislophii,Hysterothylaciumlongilabrum，H.zhoushanensis,H.amoyense,H.aduncum和宮脂屬未定種Hysterothylaciumsp.NH-2012。其中Hysterothylaciumsp.NH-20

3、12和R.lophii是優(yōu)勢(shì)種，2396個(gè)異尖科線蟲(chóng)幼蟲(chóng)樣品中有1280個(gè)為Hysterothylaciumsp.NH-2012，914條線蟲(chóng)為R.lophii，約占總數(shù)的53％和38％，在日本金線魚(yú)Namipterusjaponicus、藍(lán)圓鲹Decapterusmaruadsi、金槍魚(yú)Thunnusalalunga、帶魚(yú)Trichiurushaumela、蝴蝶魚(yú)Chaetodontidaebutterflyfish、鑲點(diǎn)石斑魚(yú)Epi

4、nephelusamblycephalus、黃鯛Dentextumifrons、線紋擬棘鯛Centroberyxlineatus、竹莢魚(yú)Trachurusjaponicus等78種所檢魚(yú)類(lèi)體內(nèi)均有發(fā)現(xiàn)，并報(bào)道了6種異尖線蟲(chóng)的形態(tài)特征及其rDNAITS序列，統(tǒng)計(jì)其在南海海魚(yú)體內(nèi)的感染情況。
　　 本實(shí)驗(yàn)還以簡(jiǎn)單異尖線蟲(chóng)Anisakissimplex為外群，將本研究獲得的6種異尖線蟲(chóng)的7種序列以及從Genbank上篩選的15個(gè)代表性

5、的ITS序列，通過(guò)MEGA5.0軟件用最大似然法(ML)和最大簡(jiǎn)約法(MP)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，分析其親緣關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，系統(tǒng)樹(shù)有兩個(gè)大的分支，宮脂屬和針蛔屬各在一支。Ea3和Hysterothylaciumfabri的親緣關(guān)系相對(duì)比較近，但并沒(méi)有聚類(lèi)在一起。Sa1和Hysterothylaciumaduncum(HQ702732.1)聚類(lèi)在一起。Pj1和Hysterothylaciumlongilabrum(JQ520159.1)聚類(lèi)在一

6、起。樣品Pe52和Hysterothylaciumamoyense(EU828749.1)聚類(lèi)在一起。Dm23、A145和Hysterothylaciumzhoushanensis(JX028280.1)、(JX028281.1)聚類(lèi)在一起。Ta2和Raphidascarislophii(JX974559.1)聚類(lèi)在一起。系統(tǒng)發(fā)育分析再次驗(yàn)證了這些線蟲(chóng)樣品的分類(lèi)地位。
　　 本論文首次對(duì)南海鱸形目魚(yú)類(lèi)體內(nèi)寄生異尖線蟲(chóng)幼蟲(chóng)的分子鑒