地膽草化學(xué)成分分離純化及抑菌作用研究.pdf

1、地膽草為菊科植物地膽草（Elephantopus scaber L.）的干燥全草，現(xiàn)收載于《廣東中藥材標(biāo)準(zhǔn)》2010版第二冊(cè)，味苦、性寒、歸脾胃經(jīng)，具有清熱、消腫、解毒、利尿等功效作用，臨床上常用地膽草及其復(fù)方治療感冒、咳嗽、水腫、皮膚癰癤等癥，曾經(jīng)也被收錄于《中國(guó)藥典》1977年版中。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，地膽草具有抗腫瘤、抗菌抗炎、保肝等作用，但是目前對(duì)于地膽草抗菌消炎作用的活性成分的研究報(bào)道并不明確。因此，本論文采用藥效學(xué)追蹤的方法，對(duì)

2、地膽草的化學(xué)成分進(jìn)行研究，探索出其抗菌作用的主要活性部位及活性化合物。
　　主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　1.以95％乙醇溶液作溶劑，對(duì)地膽草植物全草進(jìn)行提取，再分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，得到相應(yīng)的萃取部位。
　　2.選取引起皮膚化膿性感染的主要致病菌金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌及皮膚癬癥的主要致病菌紅色毛癬菌、須癬毛癬菌、犬小孢子菌作為受試菌，采用紙片擴(kuò)散法和微量稀釋法，對(duì)地膽草的乙醇提取

3、液及不同溶劑的萃取部位進(jìn)行體外抑菌活性篩選。
　　3.采用反復(fù)硅膠柱層析法、TLC薄層色譜法、Sephadex LH-20凝膠色譜法、半制備液相色譜及UPLC超高效液相色譜等對(duì)地膽草活性部位進(jìn)行了化學(xué)成分分離純化，同時(shí)利用1H-NMR、13C-NMR等波譜分析手段，結(jié)合參考文獻(xiàn)對(duì)分離到的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析。
　　4.以篩選活性部位的細(xì)菌及真菌作為受試菌，采用微量稀釋法，對(duì)地膽草活性部位分離得到的化合物進(jìn)行體外抑菌活性考察，測(cè)

4、定其最小抑菌濃度MIC值。
　　研究結(jié)果：
　　1.通過(guò)紙片擴(kuò)散法體外抑菌試驗(yàn)表明：
　　乙酸乙酯部位抑菌作用效果顯著，對(duì)金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及綠膿桿菌抑菌圈大小分別為19.33mm、7.58mm和8.96mm，對(duì)大腸桿菌抑制作用不明顯；石油醚部位抑制金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌抑菌圈大小分別10.71mm和8.56mm，正丁醇部位抑制金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌抑菌圈大小分別10.21mm和7.30mm，兩者

5、對(duì)大腸桿菌和綠膿桿菌抑制作用均不明顯。
　　乙酸乙酯部位對(duì)紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和犬小孢子菌抑菌圈大小分別為16.47mm、13.43mm和14.16mm；石油醚部位抑制紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和犬小孢子菌抑菌圈大小分別為12.67mm、8.81mm和9.10mm，正丁醇及水部位對(duì)受試真菌無(wú)抑制作用。
　　通過(guò)微量稀釋法體外抑菌試驗(yàn)表明：
　　石油醚部位對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC為0.50mg/mL，對(duì)綠膿桿菌無(wú)抑菌活性；

6、乙酸乙酯部位對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC為0.50mg/mL，對(duì)綠膿桿菌的MIC>0.5mg/mL。兩者對(duì)表皮葡萄球菌及大腸桿菌均無(wú)明顯的抑制作用，正丁醇及水部位抑菌作用不明顯。
　　石油醚部位對(duì)紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和犬小孢子菌的MIC均為0.125mg/mL；乙酸乙酯部位對(duì)紅色毛癬菌的MIC為0.063mg/mL，對(duì)須癬毛癬菌和犬小孢子菌的MIC均為0.125mg/mL。正丁醇及水部位抑制真菌作用不明顯。
　　2.從地膽草乙

7、酸乙酯活性部位中分離鑒定出12個(gè)化合物，其中包括倍半萜內(nèi)酯類4個(gè)，三萜類3個(gè)，黃酮類1個(gè)，有機(jī)酚酸類2個(gè)，甾醇2個(gè)，分別為：地膽草內(nèi)酯scabertopin(1)、異地膽草內(nèi)酯isoscabertopin(2)、去氧地膽草內(nèi)酯deoxyelephantopin(3)、異去氧地膽草內(nèi)酯 isodeoxyelephantopin(4)、木栓酮 fiedelin(5)、表無(wú)羈萜醇epifriedelanol(6)、羽扇豆醇lupeol(7)、

8、苜蓿素tricin(8)、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸isovanillic acid(9)、E-3-(3-乙氧基-4-羥基)苯甲酸E-3-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) acrylic acid(10)、Stigmasterol豆甾醇(11)、β-Stigmasterolβ-豆甾醇(12)。
　　3.通過(guò)微量稀釋法對(duì)乙酸乙酯活性部位分離到的化合物中的7個(gè)化合物進(jìn)行體外抑菌活性考察發(fā)現(xiàn)：地膽草內(nèi)酯和異地膽草內(nèi)酯

9、對(duì)金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的MIC分別為80μg/mL和160μg/mL，去氧地膽草內(nèi)酯和異去氧地膽草內(nèi)酯對(duì)金黃色葡萄球菌和表面葡萄球菌的MIC均為160μg/mL，對(duì)大腸桿菌、綠膿桿菌均無(wú)效。
　　地膽草內(nèi)酯和異地膽草內(nèi)酯對(duì)紅色毛癬菌和犬小孢子菌無(wú)效，但對(duì)須癬毛癬菌的MIC為80μg/mL，去氧地膽草內(nèi)酯和異去氧地膽草內(nèi)酯對(duì)紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和犬小孢子菌的MIC為80μg/mL。
　　研究結(jié)論：
　　本文通過(guò)