一株海洋細(xì)菌對(duì)三種赤潮甲藻抑制效應(yīng)的研究.pdf

1、近些年全球赤潮頻繁發(fā)生，給全球帶來(lái)巨大的災(zāi)害，探索行之有效的抑制藻類(lèi)途徑尤為重要。國(guó)內(nèi)外不少專(zhuān)家都在研究如何利用細(xì)菌來(lái)控制赤潮。本論文的目的就是從中國(guó)東海赤潮爆發(fā)區(qū)分離純化對(duì)赤潮藻有抑制作用的細(xì)菌。
　　第一，樣品的采集和篩選。采樣地點(diǎn)是在中國(guó)浙江舟山群島沿海進(jìn)行了一個(gè)月的科學(xué)考察，在赤潮爆發(fā)的區(qū)域進(jìn)行海水的收集采樣，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)對(duì)海水中的細(xì)菌進(jìn)行分離，純化和保種。共分離到了五種形態(tài)不同的海洋細(xì)菌。共分離到了五種形態(tài)不同的海洋細(xì)菌，

2、并研究它們是否對(duì)藻（塔瑪亞歷山大藻）具有抑制作用，篩選出一株高效溶藻菌DH-e菌株，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該菌通過(guò)代謝物來(lái)抑制藻類(lèi)的生長(zhǎng)。
　　第二，抑藻細(xì)菌的鑒定。針對(duì)這一特殊功能的細(xì)菌DH-e，進(jìn)行了16s rRNA的鑒定和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建。確定該細(xì)菌為鹽單胞菌屬一株細(xì)菌，革蘭氏陰性菌，對(duì)碳源利用非常的廣泛。無(wú)論在固體還是液體培養(yǎng)基，細(xì)菌在28℃都可以生長(zhǎng)，并且大量分泌次級(jí)代謝物。
　　第三，抑藻細(xì)菌代謝物的提取和抑藻研究。確定了在保

3、持代謝物活力的前提下，試驗(yàn)最終選擇乙酸可以作為代謝物的理想提取溶劑。然后用對(duì)所提取的代謝物進(jìn)行抑藻廣譜性和定量的分析的研究。供試藻包括：甲藻（東海原甲藻，塔瑪亞歷山大藻和米氏凱倫藻），（硅藻如三角褐指藻，小新月菱形藻，纖細(xì)角毛藻）；綠藻（小球藻），藍(lán)藻（銅綠微囊藻，擬柱胞藻）。發(fā)現(xiàn)代謝物對(duì)所選定的硅藻，綠藻和藍(lán)藻均無(wú)的顯著的抑制作用，只對(duì)東海原甲藻，塔瑪亞歷山大藻和米氏凱倫藻這些運(yùn)動(dòng)甲藻用非常顯著的抑制作用?？梢源_定該細(xì)菌對(duì)藻的抑制作用

4、具有種類(lèi)特異性。
　　第四，抑藻細(xì)菌代謝物對(duì)這三株敏感甲藻生長(zhǎng)的影響。發(fā)現(xiàn)代謝物對(duì)三株敏感甲藻的抑制濃度在14.0-35.0μg/ml之間。并且隨著共培養(yǎng)時(shí)間的推移，培養(yǎng)液中的藻細(xì)胞會(huì)逐漸的呈現(xiàn)各種病態(tài)，藻細(xì)胞失去完整性。為了進(jìn)一步驗(yàn)證代謝物的抑藻效果。本論文作了代謝物短期（5 min內(nèi)）抑制效率，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌的次級(jí)代謝物在不經(jīng)過(guò)濃縮的情況下，分泌液粗提取體積與藻液體積比為1:10時(shí)，在5 min內(nèi)甚至更短的時(shí)間內(nèi)就可以完全使培養(yǎng)液中

5、的敏感藻細(xì)胞全部喪失運(yùn)動(dòng)能力，隨后細(xì)胞出現(xiàn)裂解現(xiàn)象。在5 min內(nèi)，分泌物對(duì)赤潮藻的IC50約為0.175 mg/ml。因此，細(xì)菌的分泌物具有快速抑藻特性，可以作為抑藻劑的潛力。
　　第五，代謝物對(duì)藻細(xì)胞生理活性的影響。通過(guò)測(cè)試藻細(xì)胞內(nèi)的一些生物代表性酶的活力如CAT，T-ATP，AKP和NR的活力進(jìn)行了測(cè)定。發(fā)現(xiàn)代謝物對(duì)營(yíng)養(yǎng)吸收和能量合成沒(méi)有顯著的影響。但是，CAT先升后降表明藻細(xì)胞內(nèi)部確實(shí)受到破壞。
　　綜上所述，細(xì)菌D