基于液滴微流控芯片的抗白念珠菌藥物篩選平臺初步構(gòu)建及應(yīng)用研究.pdf

1、真菌感染的日趨嚴重以及耐藥菌株的不斷出現(xiàn)對抗真菌新藥需求日趨增長。傳統(tǒng)孔板法已經(jīng)不能滿足抗真菌藥物活性分析的高通量和高內(nèi)涵。液滴微流控芯片作為微流控芯片的一個重要分支，具有分析速度快、靈敏度高、試劑消耗少、生物相容性高、無交叉污染、高通量、微型化、集成化、自動化等特點，可以在短時間內(nèi)分析大量的藥物參數(shù)和指標，加快篩選進程。傳統(tǒng)孔板法需要將菌落孵育到一定濃度才能進行檢測，常需數(shù)天時間。液滴作為微反應(yīng)器，包裹真菌細胞即可獲得較高的菌落濃度，

2、大大減少真菌細胞孵育時間。液滴微流控芯片技術(shù)已逐漸應(yīng)用于藥物活性研究并凸顯優(yōu)勢，很有可能取代孔板，成為下一代主流的抗真菌藥物活性篩選平臺。
　　本論文以具有良好研究基礎(chǔ)的抗真菌藥物為研究對象，以液滴微流控芯片平臺為手段，構(gòu)建抗白念珠菌藥物篩選的液滴微流控芯片系統(tǒng)，初步實現(xiàn)細胞水平的抗真菌藥物活性分析。本文分為三個部分展開:
　　首先，本文設(shè)計了多種通道結(jié)構(gòu)二維圖形，采用軟光刻法以聚二甲基硅氧烷(PDMS)為材料制作了大量的液

3、滴微流控芯片，詳細討論了液滴微流控芯片的通道圖形設(shè)計和制作流程的優(yōu)化，為自行建立基于液滴微流控芯片的藥物篩選平臺打下基礎(chǔ)，為實驗室今后工作制訂較為通用的操作規(guī)程。
　　其次，本文自主構(gòu)建了用于抗白念珠菌藥物篩選的液滴微流控芯片平臺，考察了自制液滴微流控芯片的性能，優(yōu)化了液滴生成和收集的條件，為下一步藥物篩選應(yīng)用做好準備。以含1％ EA-surfactant的HFE-7500為連續(xù)相、以RPMI1640培養(yǎng)液為分散相生成了大小均一、

4、單分散性良好的液滴。離心管收集液滴室溫靜置5天仍保持形狀穩(wěn)定。
　　最后，進行了基于液滴微流控芯片的抗白念珠菌藥物篩選初步探索。采用液滴生成芯片、液滴生成和直通道收集芯片分別進行了抗真菌藥物篩選初步試驗，選擇了阿爾瑪藍作為終點指示劑，考察了芯片外孵育與芯片上孵育的可行性，根據(jù)試驗結(jié)果選定了芯片外孵育的方法作為試驗方法，最后進行了4種已知陽性藥物和新藥（艾迪康唑）的活性篩選，并用孔板法進行驗證，初步證明自行設(shè)計構(gòu)建的液滴微流控芯片平