重要蔬菜種傳檢疫性病害檢測技術研究.pdf

1、本論文簡單介紹了植物種傳病害的定義、分類已及其相關檢測技術的進展情況。真菌性種傳病害的檢測方法主要包括洗滌鏡檢、保濕培養(yǎng)、致病性測定和PCR等方法，植物病毒性病害的檢測方法主要有癥狀觀察(包括鑒別寄主反應)、血清學反應、分子生物學方法等。本論文以黃瓜綠斑駁花葉病毒、煙草環(huán)斑病毒和黃瓜黑星病菌為例，著重研究植物種傳病毒病害和植物種傳真菌病害的檢測和研究方法，并對種傳病害的檢測方法作了簡單總結。
　　 黃瓜綠斑駁病毒是典型的種傳病毒

2、，本研究以接種黃瓜綠斑駁病毒的帶毒黃瓜種子作為材料，建立了快速檢測黃瓜綠斑駁病毒的多種方法，包括DAS-ELISA法、普通RT-PCR法、熒光RT-PCR法、免疫捕獲RT-PCR法和免疫磁珠RT-PCR法，并對各種檢測方法的靈敏度進行了比較。結果表明，各種的PCR方法的靈敏度都比DAS-ELISA方法的靈敏度高，其中實時熒光RT-PCR的靈敏度最高，可檢測到2ng黃瓜種子中的黃瓜綠斑駁花葉病毒。普通RT-PCR最低可檢測到200ng黃瓜

3、種子中的黃瓜綠斑駁花葉病毒，而免疫捕獲RT-PCR(IC-RT-PCR)的靈敏度是普通RT-PCR的2倍。免疫磁珠RT-PCR(IMS-RT-PCR)檢測時，當磁珠包被的單克隆抗體濃度為1.5×10-5mg/ml時，可檢測到的最低的抗原，濃度為7.813×10-3mg/ml，靈敏度是普通RT-PCR的4倍。
　　 煙草環(huán)斑病毒是豇豆花葉病毒科，可以通過種子進行傳播，本研究通過設計TRSV外殼蛋白的特異性引物，利用實驗室現有的TR

4、SV毒源做為試驗材料，建立了檢測TRSV的普通RT-PCR方法、免疫捕獲RT-PCR方法、實時熒光RT-PCR(SYBRGreen法)的檢測方法，并且對各種檢測方法的靈敏度靈進行了研究，確定了不同方法所能檢測到的病毒最低含量。
　　 黃瓜黑星病是重要的植物種傳真菌病害，是近年來黃瓜生產中的重要病害之一，對我國黃瓜以及其他葫蘆科蔬菜和果樹生產的造成巨大損失。本研究以黃瓜黑星的三個菌株：菌株-11279、菌株-38730和菌株-沈陽

5、作為實驗材料，用PDA培養(yǎng)基進行真菌的培養(yǎng)，在20℃的黑暗和光照兩種情況下進行孢子萌發(fā)條件的研究，結果表明，在黑暗條件下孢子易萌發(fā)。再將三個菌株接種于健康黃瓜葉片上，待黃瓜成熟后取出黃瓜種子，在進行一系列的PCR方法的研究。利用真菌通用引物ITS4/5進行初步篩選，再用特異性引物HGHX-F1/R以及W-F/R和N-F/R進行普通PCR和巢式PCR反應，得出特異性DNA擴增條帶和DNA序列。將病菌的孢子形態(tài)與病菌的DNA序列結果相結合，