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文檔簡介
1、目的:檢測聚苯乙烯(PS)微球的表面粗糙程度對巨噬細胞分泌IL-1β的影響及其機制。
方法:1.應用微流控技術及乳液-溶劑揮發(fā)法制備尺寸均一,表面結構可調控的不同粗糙程度微球,用掃描電鏡(SEM)及透射電鏡(TEM)對其表面形貌進行表征;2.共聚焦顯微鏡下觀察了不同時間段Ana-1細胞系對不同粗糙程度微球的攝取和吞噬,并應用流式細胞術對不同粗糙程度微球的吞噬率進行了比較;3.用ELISA法檢測不同粗糙程度微球刺激Ana-1巨噬
2、細胞釋放炎性細胞因子IL-1β并比較其差異;4.腹腔注射入不同粗糙程度微球并用流式檢測中性粒細胞的募集,驗證其在小鼠體內引起的炎癥反應;5.用PCR反應驗證微球刺激巨噬細胞引起NLRP3炎性復合體mRNA的變化。
結果:1.通過微流控技術及乳液-溶劑揮發(fā)法這種方法可以獲得表面粗糙程度可調控的尺寸均一的不同粗糙程度PS微球;2.共聚焦顯微鏡和流式細胞術結合可以得出:PS微球在12h和24h不同時間段均可以被Ana-1細胞攝取吞噬
3、,不同粗糙程度微球被細胞吞噬率不同,并且粗糙微球周圍可以募集更多的Ana-1細胞;3.ELISA實驗顯示出微球與巨噬細胞共孵育后,不同微球組與PBS組相比,刺激細胞釋放的IL-1β多(P<0.05),而粗糙微球組相對光滑微球組釋放量更高;4.體內實驗表明:微球可以刺激腹腔炎癥,募集中性粒細胞,因為微球組比陰性對照(PBS)組募集更多的中性粒細胞(P<0.05),而粗糙微球比光滑微球刺激的中性粒細胞募集量更多(P<0.05);5.PCR反
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