NAD(H)激酶調(diào)控聚-3-羥基丁酸酯的生物合成機(jī)制研究.pdf

1、聚羥基脂肪酸酯(PHA)是一類廣泛存在于多種微生物細(xì)胞內(nèi)的儲(chǔ)能型高分子聚合物。因其兼具多樣的材料學(xué)性能、生物相容性、生物可降解性及生物可再生性而倍受科學(xué)界和工業(yè)界的廣泛關(guān)注。聚-3-羥基丁酸酯（PHB）是PHA中結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單、研究最透徹以及最早被工業(yè)化生產(chǎn)的，本論文對(duì)重組大腸桿菌中PHB的生物合成與NAD(H)激酶的過表達(dá)之間的關(guān)系進(jìn)行了研究，提高了PHB的產(chǎn)量和碳源轉(zhuǎn)化率，取得的主要研究結(jié)果如下:
　　在attB-attP位點(diǎn)特異

2、性重組技術(shù)的幫助下，將多個(gè)NAD激酶基因yfjB插入到大腸桿菌染色體上。在不影響細(xì)胞生長(zhǎng)代謝的情況下，重組菌中PHB產(chǎn)量在48 h搖瓶培養(yǎng)中達(dá)3.04 g.L-1，比對(duì)照菌提高了30％。72 h搖瓶培養(yǎng)后，PHB的產(chǎn)量達(dá)到4.24 g.L-1，是對(duì)照組的1.84倍，碳源轉(zhuǎn)化率提升了43％?；蜣D(zhuǎn)錄分析顯示PHB合成操縱子phaCAB的轉(zhuǎn)錄水平比對(duì)照菌提升了6～8倍，可能是PHB增產(chǎn)的主要原因。
　　研究了質(zhì)粒水平過表達(dá)NADH激酶