絲素蛋白材料對DNA在高溫及紫外破壞下保護作用的研究.pdf

1、脫氧核糖核酸（DNA）被廣泛應用于基因診斷，身份鑒別，醫(yī)學開發(fā)以及物種研究等眾多領域，而DNA卻對高溫，pH值，輻射，紫外線以及脫氧核糖核酸降解酶（DNase）等因素非常敏感，這使得在不同條件下對 DNA的長期保存及運輸非常不便，常常需要將DNA樣品保存于冰箱或液氮中，限制了DNA的研究和發(fā)展。在本研究中，我們用絲素蛋白材料對總 DNA（人成纖維細胞中提?。┻M行了保存，并研究經(jīng)絲素蛋白材料保存的DNA在不同破壞條件下（高溫，紫外）的穩(wěn)定

2、性。
　　本文通過對濾紙進行絲素蛋白涂層，以及用甲醇溶液對經(jīng)絲素蛋白涂層后的濾紙進行后處理工藝，制備了兩種不同的絲素蛋白涂層濾紙。通過紅外光譜檢測了幾種不同濾紙膜抽提液的絲素蛋白分子結構，并通過掃描電鏡（SEM）檢測了這幾種濾紙膜的表面形態(tài)。隨后將 DNA/Silk混合液滴入濾紙中（Silk/DNA+filter）或經(jīng)甲醇處理過的絲素蛋白涂層濾紙（Silk/DNA+PT-filter）中，以上樣品經(jīng)通風干燥后用超純水進行抽提。最后

3、我們用凝膠電泳對以上樣品進行檢測，結合溫度穩(wěn)定性以及紫外破壞實驗可以得出以下結論：6％ Silk/DNA+PT-filter樣品對 DNA保存效果較3%Silk/DNA+filter樣品以及DNA+filter更好，在37oC保存40天后，仍然能保留40%的DNA；在紫外(245 nm)照射10小時后仍然能保留10%的DNA。而使用TBE緩沖液也能夠加強DNA的保存或抽提。經(jīng)過絲素蛋白涂層濾紙膜保存的DNA也可用作ZNF750基因PCR