富油淡水微藻的分離、鑒定與培養(yǎng)條件優(yōu)化.pdf

1、生物柴油是一種綠色可持續(xù)的新能源，微藻是生產(chǎn)生物柴油的重要原料之一，具備生長速度快、富含油脂、不與人爭糧爭地及環(huán)保優(yōu)勢強等優(yōu)點，因此以微藻為原料生產(chǎn)生物柴油具有潛在的優(yōu)勢。實現(xiàn)微藻生物柴油制備技術(shù)的首要和關(guān)鍵環(huán)節(jié)是高含油微藻藻株的篩選。為了獲得性能優(yōu)越的富油藻株，主要研究結(jié)果如下:
　　1.自南京市采集了16個水樣樣品和10個土壤樣品，采用稀釋涂布平板法分離、純化，獲得130株自然藻株。
　　2.以實驗室保存藻株Chlore

2、lla sorokiniana Ls-2為對照，通過測定OD680篩選上述130株藻株中生長速度快、細胞密度高的藻株，共獲得32株。隨后以生物量及油脂產(chǎn)量為復篩指標，獲得2株生物量和產(chǎn)油量較高的藻株Wt5-6和W9-2，對應的生物量分別為1.2 g/L和1.4 g/L，油脂產(chǎn)量分別為0.2 g/L和0.238 g/L。進一步研究發(fā)現(xiàn)，W9-2為自養(yǎng)生長藻種，而Wt5-6可以葡萄糖為有機碳源進行異養(yǎng)生長。
　　3.通過形態(tài)觀察對復篩

3、的兩株藻株Wt5-6和W9-2進行初步鑒定，結(jié)果顯示兩株藻株都呈球狀，隨后擴增這兩株藻的18S rDNA序列，并進行Blastn比對。結(jié)果顯示W(wǎng)t5-6與凱氏擬小球藻Parachlorella kessleri(SAG211-11C)，W9-2與小球藻屬Chlorella sorokiniana(AB080307.1)的序列一致性均為100％，因此將這兩株藻分別命名為Parachlorella kessleri Wt5-6和Chlore

4、lla sorokiniana W9-2。
　　4.為了進一步提高優(yōu)勢藻種的生物量和油脂積累能力，首先嘗試利用化學調(diào)控提高自養(yǎng)生長藻株Chlorella sorokiniana W9-2的生物量和油脂合成的可能性。將C.sorokiniana W9-2分別接種到添加甘油、α-萘乙酸(NAA)及二甲亞砜(DMSO)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，結(jié)果表明，甘油處理會提高小球藻W9-2的生物量和油脂產(chǎn)量，甘油濃度為10 mL/L時，生物量最大，為2.

5、91 g/L，較對照生物量增加了127.34％，此時油脂產(chǎn)量同時達到最大，為0.29 g/L，較對照油脂產(chǎn)量提高了35.9％; NAA處理亦會提高小球藻W9-2生物量和油脂產(chǎn)量，NAA濃度為2 mg/L，其生物量達到最大，為2.26 g/L，較對照提高了82.25％，此時油脂產(chǎn)量為0.25 g/L，較對照提高了17.07％;DMSO抑制小球藻W9-2的生長和油脂的積累。
　　5.嘗試對可異養(yǎng)生長凱氏擬小球藻Parachlorell

6、a kessleri Wt5-6進行異養(yǎng)培養(yǎng)條件的優(yōu)化，期望微藻生物量和油脂產(chǎn)量有較大的提升。單因素實驗結(jié)果表明該藻株異養(yǎng)生長的最適碳源為葡萄糖、最適氮源為酵母粉;采用響應面設計優(yōu)化培養(yǎng)基中的碳、氮源，結(jié)果為添加86.73 g/L的葡萄糖和11.97 g/L酵母粉時，凱氏擬小球藻Wt5-6可獲得最大生物量和油脂含量，分別對應為39.01g/L和12.03 g/L，生物量和油脂含量較自養(yǎng)分別增加29倍和60倍;通過GC分析，該藻油中主要脂