以透明質酸修飾的單壁碳納米管為載體的腫瘤靶向造影劑的研究.pdf

1、近年來，惡性腫瘤的發(fā)病率逐年攀升，其早期診斷尤為重要。磁共振成像技術是臨床腫瘤診斷的重要手段之一，目前，臨床上所使用的大部分磁共振造影劑均存在弛豫效能低、特異性差、半衰期短和毒性大的缺點。因此，發(fā)展一種新型造影劑迫在眉睫。
　　有國外文獻報道，將Gd3+沉積到短單壁碳納米管(SWCNTs)內(nèi)可以極大提高其弛豫效能。另外，SWCNTs還具有多個結合位點，在結合藥物分子的同時還可以結合靶向分子，這為構建腫瘤靶向造影劑提供了新的思路。<

2、br>　　透明質酸(HA)是一種具有良好生物相容性、生物可降解性的天然線性多糖，研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞表面存在多種HA特異性受體，利用HA這些特性可將其作為靶頭裝載到SWCNTs表面構建腫瘤靶向造影劑，從而達到藥物緩釋和靶向運輸?shù)哪康摹?br>　　本文以HA修飾的單壁碳納米管為腫瘤靶向轉運載體，將順磁性小分子GdCl3通過物理吸附作用吸附到HA-SWCNTs載體上，構建腫瘤靶向性Gd/HA-SWCNTs造影劑。通過細胞攝取實驗、體內(nèi)外毒性實驗

3、和腫瘤磁共振成像實驗對該造影劑系統(tǒng)進行了全面綜合評價，結果顯示Gd/HA-SWCNTs是一種高效、定向、緩釋、低毒的核磁共振造影劑。具體內(nèi)容如下:
　　1.腫瘤靶向HA-SWCNTs載體的合成及Gd/HA-SWCNTs造影劑的構建。首先將SWCNTs通過濃硫酸和濃硝酸進行羧基化反應生成SWCNT-COOH，然后將HA通過亞烷基二胺為連接臂和其進行共價相連制得HA-SWCNTs載體，通過物理吸附作用將Gd3+負載到所得載體上，經(jīng)過透

4、析即得Gd/HA-SWCNTs。通過透射電鏡、紫外全波長掃描和傅里葉紅外光譜對SWCNTs的共價修飾進行表征，通過熱重分析對所得載體進行分析，確證共價修飾。通過不同的藥物載體比例對載藥量進行篩選。透射電鏡、紫外光譜、紅外光譜和熱重分析結果共同驗證了HA-SWCNTs的成功制備，其中有42.27％的HA與SWCNTs成功偶聯(lián);當表面活性劑為10mg/ml的大豆卵磷脂，探頭超聲時間為30min，藥物載體比例為7∶1時載藥效果最好，載藥量達到

5、22.58％。
　　2.熒光顯微鏡法和細胞流式分析法考察MCF-7細胞對HA-SWCNTs載體的攝取能力。熒光顯微鏡法結果顯示，6h時HA-SWCNTs組信號達到高亮，比同時間點SWCNTs組信號強;細胞流式分析結果分析可知在6h時，MCF-7細胞對HA-SWCNTs的攝取率高達97.9％，而對SWCNTs的攝取率僅為87.4％。兩種方法均驗證了細胞對HA-SWCNTs的高攝取能力。
　　3.SRB法和HE染色法分別考察所制

6、備Gd/HA-SWCNTs的體內(nèi)外毒性。SRB法結果顯示，當Gd3+濃度達到50μg/ml時，細胞生存率仍在90％以上，Gd/HA-SWCNTs未表現(xiàn)出明顯的細胞毒性;HE染色結果表明，當按照Gd3+為0.72mg/kg的劑量給藥時，Gd/HA-SWCNTs對各器官均沒有毒性作用。
　　4.化學方法測定Gd/HA-SWCNTs在小鼠腫瘤部位的吸收和靶向參數(shù)，用7.0T小動物專用磁共振成像儀測定該造影劑的成像性能。結果顯示:Gd/H