以藻酸鈣和透明質(zhì)酸為載體的可注射軟骨材料研究.pdf

1、目的:
　　可注射性組織工程軟骨是組織工程軟骨研究的新方向，具有損傷小、易操作等優(yōu)點[1]。藻酸鹽（alginate，ALG）凝膠和透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid，HA)是具有可塑性的組織工程細胞外支架，可用于研究可注射性組織工程軟骨的構(gòu)建[2-4]。肋軟骨和殘耳軟骨可通過體外擴增作為組織工程軟骨的種子細胞[5]。本課題利用肋軟骨和殘耳軟骨兩種種子細胞，初步研究藻酸鈣凝膠和透明質(zhì)酸鈉作為可注射組織工程軟骨支架材料的可行性

2、，以及兩種種子細胞的差異。
　　方法:
　　1.收集先天性小耳畸形患者的肋軟骨和殘耳軟骨，分別體外分離培養(yǎng)肋軟骨細胞和殘耳軟骨細胞，將第3～4代軟骨細胞制成ALG-肋軟骨細胞凝珠（A組）和ALG-殘耳軟骨細胞凝珠（B組）(ALG濃度約為25g/L，細胞濃度為1.3×106/mL)。體外培養(yǎng)并通過倒置顯微鏡觀察，分別于1周、2周取材，行HE、Masson染色，評價兩種細胞在ALG凝珠中的增殖分化情況。
　　2.第二部分:

3、體外分離培養(yǎng)肋軟骨細胞（A組）和殘耳軟骨細胞（B組），收集第3～4代軟骨細胞.分別與HA、ALG混合注射于裸鼠（Nu/Nu，8w大，雄性）皮下。HA實驗組行單純HA注射（潤百顏(@)，含透明質(zhì)酸23±0.5mg/mL;0.1mL/點，1點/鼠）、單純細胞懸液注射（0.1mL/點，2點/鼠）、HA-細胞懸液混合注射（0.1mL HA+0.1mL細胞懸液/點，2點/鼠），于注射后10天、30天、50天取材;ALG實驗組行單純ALG凝膠（0.

4、1mL/點，2點/鼠）和ALG-軟骨細胞凝膠（0.1mL/點，4點/鼠）注射，于注射后30天取材。兩組取材后行HE、Masson染色，分析不同注射物和注射時間的注射部位真皮膠原密度及真皮厚度的變化。
　　結(jié)果:
　　第一部分:ALG-軟骨細胞凝珠在體外培養(yǎng)2周情況下可呈穩(wěn)定形態(tài)存在，凝珠內(nèi)軟骨細胞生長情況良好，可增殖、分化。
　　第二部分:1.所有時間點的HA-軟骨細胞混合注射組未觀察到軟骨樣組織形成，ALG-軟骨細胞

5、凝膠注射每個注射點均有軟骨樣組織形成，44％(16/36)的單純軟骨細胞懸液注射點形成軟骨樣組織，且最接近成熟軟骨，肋軟骨細胞組和殘耳軟骨細胞組無明顯差異;2.真皮膠原密度和厚度隨注射時間的增加而增加，不同注射物之間真皮厚度和真皮膠原密度的差異不具備統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　本研究條件下
　　1.肋軟骨細胞和殘耳軟骨細胞作為軟骨組織工程種子細胞差異不大;
　　2.ALG凝膠適合作為可注射性支架材料用于組織工程