紫杉醇-透明質(zhì)酸復(fù)合凍干注射制劑的研究.pdf

1、為減少紫杉醇的毒副作用，提高藥物的治療效果及抗轉(zhuǎn)移活性，本文設(shè)計(jì)制備了新的“細(xì)胞毒藥物—非細(xì)胞毒成分”組合型紫杉醇透明質(zhì)酸注射用凍干制劑，篩選了制劑的處方；對(duì)制劑中各個(gè)組分間的相互作用進(jìn)行了研究；模擬體內(nèi)環(huán)境考察了制劑的釋放特性；研究了制劑體外、體內(nèi)抗腫瘤活性。將制劑的穩(wěn)定性、抗腫瘤活性與其組成相聯(lián)系，建立了制劑組成與穩(wěn)定性、抗腫瘤活性的關(guān)系，用以指導(dǎo)制劑的研究與開發(fā)。主要進(jìn)行了以下工作。 1.以天然多糖透明質(zhì)酸為藥物紫杉醇的載

2、體，以CremophorEL為增溶劑，甘露醇、葡萄糖為助溶解劑，丙二醇為潤(rùn)濕劑，檸檬酸或碳酸氫鈉為緩沖劑，運(yùn)用凍干法和噴霧干燥法制備了紫杉醇透明質(zhì)酸復(fù)合制劑?？疾炝烁鱾€(gè)組分對(duì)制劑的溶解速度、相容性及穩(wěn)定性的影響，對(duì)制劑制備工藝和收率進(jìn)行了考察，確定了制劑的制備方法及制劑的基本處方組成。對(duì)制劑的穩(wěn)定性、溶解速度等相關(guān)物化性質(zhì)進(jìn)行了初步的考察，說明該組方穩(wěn)定性較好，且可滿足注射要求。 2.研究了制劑基質(zhì)組分間的相互作用及影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)

3、果顯示，透明質(zhì)酸對(duì)非離子表面活性劑的膠束形成、臨界膠束濃度無(wú)明顯影響。即透明質(zhì)酸的加入基本不影響表面活性劑對(duì)難溶性藥物的增溶效果。也說明非離子表面活性劑與透明質(zhì)酸的相互作用較弱，主要是范德華力和氫鍵的影響。而陰離子表面活性劑十二烷基磺酸鈉(SDS)與透明質(zhì)酸間存在一定的相互作用，透明質(zhì)酸的加入，可以使SDS的臨界膠束濃度降低。小分子助溶解劑與透明質(zhì)酸之間主要是氫鍵的作用；對(duì)表面活性劑的增溶效果有一定的減弱作用，然而，鹽的加入使得該影響基

4、本消失。說明在生理鹽水中藥物的穩(wěn)定性更好。 3.考察了凍干制劑對(duì)Hela、非小細(xì)胞肺癌A549兩種腫瘤細(xì)胞的體外抑制活性。IC50數(shù)據(jù)顯示，凍干制劑對(duì)Hela和非小細(xì)胞肺癌兩種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制優(yōu)于紫杉醇注射劑；盡管HA在前24～48小時(shí)對(duì)兩種細(xì)胞有一定保護(hù)作用，但在72小時(shí)的抑制作用優(yōu)于或與紫杉醇基本一致。對(duì)凍干制劑作用下腫瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn)，前期細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)無(wú)變化，但進(jìn)入細(xì)胞周期的數(shù)目減少，說明透明質(zhì)酸與紫杉醇可以

5、同時(shí)抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)。 4.在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，研究了凍干制劑對(duì)小鼠宮頸癌U14、小鼠肉瘤S180和小鼠Lewis肺癌移植模型的作用效果和對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠的毒性。在相當(dāng)于紫杉醇5mg/kg劑量時(shí)，荷宮頸癌U14小鼠的生命延長(zhǎng)期達(dá)到135.5％，小鼠肉瘤S180的抑制率達(dá)到42.7％，對(duì)小鼠Lewis肺癌的抗轉(zhuǎn)移活性達(dá)到36.3％，表明凍干制劑對(duì)三種腫瘤模型均有較高的抑制活性。與紫杉醇相比，凍干制劑的作用效果均明顯增加。而凍干制劑對(duì)小鼠的毒性和

6、過敏性均低于紫杉醇，毒性的降低與透明質(zhì)酸的控制釋放及藥物介導(dǎo)有關(guān)，這也是該凍干制劑的優(yōu)點(diǎn)所在。藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)表明凍干制劑可以保持較高的血藥濃度，并可延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的循環(huán)周期，這與凍干制劑的藥效提高相一致。血漿和尿樣的LC-MS分析結(jié)果顯示，透明質(zhì)酸的加入對(duì)紫杉醇的代謝速度有一定的降低作用，而在尿液中的代謝產(chǎn)物排泄量較紫杉醇注射劑而言，有所提高，這可能是新制劑毒性較低，停藥后小鼠生長(zhǎng)較快的原因。 5.對(duì)注射凍干制劑的小鼠血清蛋白質(zhì)

7、分析表明，凍干制劑可以明顯上調(diào)小鼠血漿中的維生素D結(jié)合蛋白的表達(dá)，通過該蛋白可以激活被腫瘤細(xì)胞抑制的免疫系統(tǒng)中的巨噬細(xì)胞及其它免疫細(xì)胞的表達(dá)，從而，提高了藥物的抗腫瘤治療效果。 6.對(duì)紫杉醇透明質(zhì)酸凍干制劑的體內(nèi)、外抗腫瘤活性、藥物代謝動(dòng)力學(xué)等特性及制劑穩(wěn)定性進(jìn)行綜合分析認(rèn)為，該凍干制劑在抗腫瘤轉(zhuǎn)移和延長(zhǎng)腫瘤患者生命周期方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。而對(duì)免疫系統(tǒng)的影響提示以透明質(zhì)酸為基質(zhì)的該類藥物制劑有可能用于免疫缺陷性疾病。