HIV-AIDS患者miR-155表達(dá)及其在HIV-1異常免疫活化中作用.pdf

1、背景：非特異性、廣泛的異常免疫激活是人類免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiency virus，簡(jiǎn)稱HIV）感染進(jìn)展為獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的一個(gè)重要標(biāo)志，HIV-1感染過程中持續(xù)的抗原刺激和異常免疫活化可以導(dǎo)致免疫耗竭，同時(shí)導(dǎo)致效應(yīng)細(xì)胞功能失調(diào)及喪失增殖能力。免疫活化水平及免疫衰竭水平是艾滋病疾病進(jìn)展的重要標(biāo)志。長(zhǎng)期有效HAART能夠抑制HIV復(fù)制及異常免疫激活，逐步實(shí)現(xiàn)免疫重建，降低發(fā)病率和死亡率，但感染者體

2、內(nèi)仍有病毒持續(xù)存在，原因在于HIV在感染早期就建立一個(gè)潛伏庫(kù)，該潛伏庫(kù)主要由靜患記憶型CD4+T細(xì)胞組成，這些細(xì)胞的基因組中整合有HIV反轉(zhuǎn)錄生成的原病毒DNA，轉(zhuǎn)錄受到抑制或轉(zhuǎn)錄水平極低，宿主免疫系統(tǒng)無(wú)法識(shí)別和清除該潛伏庫(kù)病毒。但是HIV感染者一旦停止HAART該潛伏庫(kù)病毒又會(huì)繼續(xù)活化轉(zhuǎn)錄復(fù)制，即出現(xiàn)體內(nèi)病毒反彈，病毒的大量復(fù)制又進(jìn)一步導(dǎo)致異常免疫活化。HIV異常免疫活化和病毒潛伏庫(kù)的存在是HIV病毒持續(xù)感染的重要因素。
　　M

3、iR-155是調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的重要microRNA，在調(diào)控免疫反應(yīng)和淋巴細(xì)胞分化等方面具有重要作用。在各種活化的免疫細(xì)胞，特別是在效應(yīng)/效應(yīng)記憶CD8+T細(xì)胞中表達(dá)顯著上調(diào)，而中央記憶性CD8+T細(xì)胞呈低水平表達(dá)。Seddiki等人已研究證實(shí)，在HIV-1感染中，miR-155通過調(diào)控初始型調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞向活化的細(xì)胞子集轉(zhuǎn)換，進(jìn)而影響HIV-1的病理進(jìn)展。
　　MiR-155異常表達(dá)也參與HIV潛伏庫(kù)細(xì)胞的形成。有研究

4、顯示miR-155可以靶向作用于TRIM32，使短暫激活的潛伏庫(kù)細(xì)胞回到潛伏狀態(tài)。此外，miR-155通過作用于HIV-1復(fù)制依賴的宿主因子（這些宿主因子參與整合前復(fù)合體的核轉(zhuǎn)運(yùn)過程）使HIV病毒復(fù)制中斷，使用miR-155處理宿主巨噬細(xì)胞顯示整合前復(fù)合物（晚期逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物）增多。目前對(duì)在HIV-1感染者外周血中的表達(dá)特征及其在HIV病理機(jī)制中的作用不甚清楚。明確miR-155異常表達(dá)及其與HIV/AIDS患者的免疫活化及HIV-1 DN

5、A相關(guān)性，對(duì)HIV/AIDS的臨床診治具有重要意義。
　　目的：明確miR-155在HIV-1感染者外周血中的表達(dá)特征及其與HIV/AIDS患者機(jī)體免疫活化及HIV-1 DNA相關(guān)性，通過細(xì)胞模型驗(yàn)證miR-155表達(dá)調(diào)控對(duì)潛伏細(xì)胞激活及HIV病毒復(fù)制的影響。
　　方法：
　　1.研究對(duì)象:收集HIV感染者（分為HARRT治療成功者64例、失敗者57例，未治療者40例）、正常對(duì)照者35例臨床資料，同時(shí)收集分離以上研究組

6、和對(duì)照組血漿和PBMC、CD4+T、CD8+T細(xì)胞。
　　2.miR-155檢測(cè):采用熒光定量PCR檢測(cè)在HIV感染者各組和正常對(duì)照者血漿和細(xì)胞(PBMC、CD4+T、CD8+T)中表達(dá)變化，同時(shí)流式檢測(cè)CD4+T、CD8+T細(xì)胞數(shù)，免疫細(xì)胞活化(CD4/CD8 CD38)及免疫衰竭(PD1)相關(guān)指標(biāo);進(jìn)一步分析HIV感染者miR-155的表達(dá)水平與CD4+、CD8+T細(xì)胞免疫活化和免疫耗竭水平相關(guān)性。
　　3.HIV-1D

7、NA檢測(cè):采用HIV-1DNA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)HIV感染者（HARRT治療成功者，失敗者，未治療者）全血HIV DNA含量;進(jìn)一步分析:miR-155表達(dá)水平與HIV-1 DNA相關(guān)性;
　　4.在潛伏細(xì)胞(J-Lat)及HIV感染細(xì)胞(H9/HIVⅢB)上過表達(dá)或抑制miR-155，驗(yàn)證miR-155表達(dá)調(diào)控對(duì)潛伏細(xì)胞激活及HIV感染細(xì)胞HIV病毒復(fù)制的影響。（核心抗原P24的水平通常被認(rèn)為是病毒復(fù)制的間接標(biāo)志，我們通過檢測(cè)P24

8、來(lái)評(píng)價(jià)miR-155表達(dá)調(diào)控對(duì)潛伏細(xì)胞激活及HIV病毒復(fù)制的影響）
　　5.統(tǒng)計(jì)方法:所有數(shù)據(jù)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。檢測(cè)結(jié)果均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示。兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組樣本均數(shù)比較采用One-way ANOVA，相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)分析方法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.HIV-1感染者外周血PBMC、CD4+T、CD8+T細(xì)胞miR-155表達(dá)

9、顯著高于正常對(duì)照(P＜0.01); HAART治療成功者較治療失敗者顯著下降(P＜0.05)，且接近正常水平;血漿miR-155表達(dá)水平與細(xì)胞相反
　　2.HIV病毒感染導(dǎo)致CD4+T、CD8+T細(xì)胞異常免疫活化(CD38)和免疫耗竭(PD1)，有效HAART治療能夠改善CD4+T、CD8+T細(xì)胞免疫活化和免疫耗竭水平，進(jìn)一步相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，miR-155表達(dá)與HIV-1感染者T細(xì)胞免疫活化CD38、免疫耗竭PD-1正相關(guān);

10、>　　3.HAART治療成功組HIV-1DNA顯著低于治療失敗和未治療組(P＜0.01)，HIV-1DNA與CD4+T細(xì)胞miR-155表達(dá)水平正相關(guān)，與CD4+T免疫活化水平正相關(guān);
　　4.過表達(dá)miR-155可以減少潛伏細(xì)胞激活后P24抗原的表達(dá)，但是對(duì)HIV-1慢性感染細(xì)胞(H9/HIVⅢB)HIV-1P24抗原的表達(dá)沒有影響。
　　結(jié)論：
　　1.HIV-1感染者miR-155表達(dá)水平升高且與HIV-1感染者