基于鄰苯二甲酸酯的四種人工抗原的制備及免疫鑒定.pdf

1、塑化劑是工業(yè)上廣泛應(yīng)用的增塑劑，有增強物質(zhì)柔韌性的作用。主要用于聚氯乙烯塑料、食品包裝袋、兒童玩具、香料、化妝品等的生產(chǎn)。同時塑化劑也是環(huán)境激素類污染物，它可以在一定條件下從塑料中通過溶出、遷移和排放等途徑進入周圍生態(tài)環(huán)境，甚至通過皮膚、呼吸系統(tǒng)和消化系統(tǒng)進入人體，進而對人體健康造成潛在危害。因此，建立一種快速檢測塑化劑的方法具有十分重要的意義。
　　本文以4-硝基鄰苯二甲酸為原料，分別與不同的醇反應(yīng)衍生合成四種塑化劑結(jié)構(gòu)類似物，

2、包括直鏈結(jié)構(gòu)的4-氨基鄰苯二甲酸二丁酯、支鏈結(jié)構(gòu)的4-氨基鄰苯二甲酸二異丁酯、具有連接臂的4-戊二酸單酰鄰苯二甲酸二丁酯和具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的4-氨基鄰苯二甲酸二環(huán)己酯。通過重氮化法和活潑酯法將各種半抗原衍生物與載體蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián)制得人工抗原。利用氫核磁共振譜圖(1H NMR)、質(zhì)譜(MS)和紅外譜圖（IR）鑒定了主要的衍生物結(jié)構(gòu)。利用紫外光譜掃描和SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測鑒定人工

3、抗原，并用四種與BSA偶聯(lián)的人工抗原作免疫原免疫新西蘭大白兔，以制備多克隆抗體。利用酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)檢測抗體靈敏度和特異性。經(jīng)紫外光譜和SDS-PAGE電泳證實人工抗原偶聯(lián)成功，經(jīng)免疫分析法檢測抗體效價，DBAP-BSA抗體達到1∶64000，DBCP-BSA、DiBAP-BSA和DCHAP-BSA抗體效價均達到1∶128000。檢出限分別是:DBAP-BSA(52.8ng/mL)、DBCP-BSA(35，5ng/mL)、D

4、iBAP-BSA(8.7ng/mL)、DCHAP-BSA(11.9ng/mL)。最佳工作范圍分別為:DBAP-BSA(81.96～1138.037ng/mL)、 DBCP-BSA(55.72～832.945ng/mL)、 DiBAP-BSA(16.753～857.328ng/mL)、DCHAP-BSA(63.997～1222.221 ng/mL)。樣品加標回收率均在86％～105％范圍內(nèi)。由此可以得出以下結(jié)論：⑴成功合成四種塑化劑半抗原