一種熒光染料的合及及光譜表征.pdf

1、花菁染料是在近年來發(fā)展起來的一類以吲哚等雜環(huán)結(jié)構(gòu)為主體結(jié)構(gòu)的新型生物熒光染料。經(jīng)過修飾改性后可以形成易溶于水、光穩(wěn)定性好、熒光量子產(chǎn)率高的染料衍生物,因?yàn)檫胚彷既玖系奈蘸蜔晒獍l(fā)射波長都在近紅外區(qū),避免了生物大分子自身的熒光干擾,提高了檢測的靈敏度,適合作為生物大分子的定量分析,廣泛應(yīng)用于核酸及其他生物分子的標(biāo)記和檢測。熒光標(biāo)記作為一種非放射性的標(biāo)記技術(shù)受到很大程度的重視,并取得了迅速的發(fā)展,本文研究了Alexa系列的新型吲哚菁染料合成

2、以及其光譜特征和對蛋白質(zhì)的標(biāo)記。
　　 論文第一章綜述了常見的熒光標(biāo)記試劑和及它們的優(yōu)缺點(diǎn),重點(diǎn)介紹了Cy系列吲哚菁試劑的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、光譜特征、光穩(wěn)定性及水溶性和合成方法的進(jìn)展以及新型的吲哚菁系列染料在生物大分子熒光標(biāo)記方面的進(jìn)展。
　　 論文第二章合成了染料各個(gè)中間體,并做了純化和表征。首先以丙炔醇為原料,采用一鍋法經(jīng)三氧化鉻氧化生成丙炔醛后,直接與苯胺反應(yīng)合成了B-苯胺基丙烯醛縮苯胺,對粗品進(jìn)行重結(jié)晶純化。然后以2-甲

3、基乙酰乙酸乙酯、6-溴己酸乙酯為原料合成7-甲基-8-羰基壬酸,再與對肼基苯磺酸反應(yīng)生成2,3-二甲基-3-(5-戊羧基)-5-磺酸基-1-(3-磺酸)吲哚,以1,3-丙磺酸內(nèi)酯為吲哚環(huán)中氮原子上的季按鹽化試劑進(jìn)行季氨化反應(yīng),然后和β-苯胺基丙烯醛縮苯胺縮合等多步反應(yīng)合成了新型的Alexa吲哚菁染料。
　　 論文第三章測定了合成的吲哚菁染料的可見吸收光譜、熒光發(fā)射光譜和熱穩(wěn)定性,結(jié)果表明:(1)Alexa吲哚菁染料在PBS、甲醇

4、、DMF、DMSO中的紫外吸收和熒光發(fā)射光譜的峰形相似,但在質(zhì)子溶劑中,當(dāng)溶劑的極性減小時(shí),染料的最大吸收和熒光發(fā)射波長發(fā)生紅移;(2)在30～65℃溫度范圍內(nèi),染料在650nm下的吸收值變化幅度很小,說明該染料在測試溫度范圍中是穩(wěn)定的。
　　 論文在第四章合成了吲哚菁染料的活性酯衍生物,利用活化酯試劑(2-琥珀酰亞胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯,TSTU)將合成的染料活化后可以直接與蛋白質(zhì)的氨基在水相中反應(yīng),生成酰胺