14826.一種新型染料脫色過氧化物酶的鑒定及表征

1、碩士學位論文IdentificationandBiochemicalCharacterizationofaNovelDyedecolorizingPeroxidase學號：21018006完成日期：2Ql墨生魚旦大連理工大學DalianUniversityofTechnology大連理工大學碩士學位論文摘要染料脫色過氧化物酶(dyedecolorizingperoxidase)是含有血紅素，能降解各種有毒染料的一類蛋白，并且可以參與菌體

2、氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)，提高菌體對氧化壓力的抗性。運動發(fā)酵單胞菌ZymomonasmobilisZM4(ATCC31821)中有一種假定過氧化物酶基因，它編碼的蛋白(稱為ZmDyP)包含與其他染料脫色過氧化物酶共同保守的氨基酸D149，R239，T254，F(xiàn)256和GXXDG結(jié)構(gòu)基序，說明ZmDyP是染料脫色過氧化物酶家族的一個新成員。但目前沒有其酶學性質(zhì)及功能等相關(guān)報道。本研究以ZmobilisZM4基因組DNA為模板，通過PCR擴增目的基因，

3、克隆到大腸桿菌表達載體pET21b()中。構(gòu)建成功的質(zhì)粒pET21bZmDyP轉(zhuǎn)化到EscherichiacoliBL21(DE3)／pLysS中，經(jīng)IPTG誘導表達后，通過金屬螯合層析純化ZmDyP。SDSPAGE分析，純酶的分子量為36kDa，而活性染色顯示分子量為108kDa，表明這個酶在活性狀態(tài)下可能是一個三聚體。光譜掃描顯示ZmDyV有一個典型的血紅素吸收峰，說明它是含有血紅素的蛋白。對ZmDyV酶學性質(zhì)進行了研究，發(fā)現(xiàn)以2，

4、2一二氨一雙(3乙基苯并噻唑6磺酸)ABTS為底物，ZmDyP表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)化效率。意想不到的是，在有高濃度異戊醇的環(huán)境中，不需要H202，ZmDyP與底物反應(yīng)的活性會增強，這項特性在其它染料脫色過氧化物酶或血紅素過氧化物酶中還沒有研究過，因此這將是血紅素過氧化物酶研究的一個新方向。此外，對ZmDyP的生理功能進行了探索，發(fā)現(xiàn)它很可能通過提高對氧化壓力的抗性，賦予宿主菌的生長優(yōu)勢。這些研究結(jié)果豐富了染料脫色過氧化物酶家族信息，并且為Zm