小麥過氧化物酶基因TaPrx的遺傳轉(zhuǎn)化及耐旱耐鹽功能鑒定.pdf

1、小麥在受到干旱、鹽堿、高低溫等逆境脅迫時(shí)，植物體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生并積累不同類型的活性氧（Reactive oxygen species，ROS），這些活性氧會(huì)對(duì)植物體造成一定的傷害甚至導(dǎo)致植物的死亡。過氧化物酶（Peroxiredoxin，Prx）被認(rèn)為可以清除植物體內(nèi)多余的活性氧，保護(hù)植物不受損害，從而提高了植物的抗逆能力。本研究在小麥種質(zhì)Apogee73S2中分離得到一個(gè)TaPrx基因，并對(duì)該基因構(gòu)建了兩個(gè)表達(dá)載體。利用基因槍法將TaPrx

2、基因?qū)肫胀ㄐ←溈妻r(nóng)199中，經(jīng)過除草劑篩選和PCR檢測(cè)，得到2棵轉(zhuǎn)基因植株;經(jīng)加代得到純合后，對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了耐旱、耐鹽功能鑒定;同時(shí)本研究還利用煙草和洋蔥對(duì)TaPrx基因進(jìn)行了亞細(xì)胞定位研究。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)相關(guān)表達(dá)載體的構(gòu)建:將TaPrx基因構(gòu)建到載體pBIN-eGFP和PC186上，得到了亞細(xì)胞定位載體pBIN-Prx-eGFP和基因槍法過表達(dá)載體PC186-Bar-Hpt-Prx。
　　(2)TaP

3、rx的小麥基因槍遺傳轉(zhuǎn)化:通過組織培養(yǎng)獲得科農(nóng)199幼胚愈傷組織2082個(gè)，經(jīng)基因槍轟擊和分化篩選后得到抗性苗174棵，通過提取DNA進(jìn)行PCR檢測(cè)，初步確定通過基因槍遺傳轉(zhuǎn)化得到2棵TaPrx轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株。對(duì)這兩株轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株進(jìn)行小麥加代處理，以繁殖獲得純合的轉(zhuǎn)基因植株后代。分別對(duì)轉(zhuǎn)基因受體材料科農(nóng)199和經(jīng)加代繁殖得到的純合轉(zhuǎn)基因植株后代提取RNA，利用qRT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因植株中TaPrx基因表達(dá)量是受體科農(nóng)199中的