土壤中煙嘧磺隆降解菌株的篩選及其菌劑加工.pdf

1、煙嘧磺隆是玉米田廣泛使用的除草劑，由于持效期長，在土壤中不易自然分解，加上易淋溶，容易引起環(huán)境問題，為此，研究切實可行的煙嘧磺隆修復(fù)辦法具有現(xiàn)實意義。本試驗通過對三種土樣馴化及富集培養(yǎng)，成功篩選分離出8株可降解煙嘧磺隆的菌株，針對其中降解效果最好的YQ14菌株進(jìn)行了最佳降解條件篩選和發(fā)酵條件優(yōu)化，并初步制得菌劑，主要研究內(nèi)容如下:
　　1.利用富集培養(yǎng)技術(shù)從土壤樣品1中得到4株菌株，分別編號為YQ1、YQ2、YQ3、YQ14，從土

2、壤樣品2中得到2株菌株，分別編號為SQ4、SZ14，從土壤樣品3中篩選得到兩株菌株，分別編號為HQ5、HQ6。制得菌懸液后定量接種于培養(yǎng)基Ⅲ中，添加5 mg/L的煙嘧磺隆原藥，設(shè)置震蕩培養(yǎng)箱溫度為30℃、轉(zhuǎn)速為150 r/min，培養(yǎng)5d后，通過HPLC檢測各處理組中煙嘧磺隆含量，計算降解率。結(jié)果發(fā)現(xiàn):當(dāng)煙嘧磺隆濃度為5 mg/L時，YQ14的降解率最高，為84.3％，其次是YQ1和YQ2，分別為53.1％和62.3％。對降解率較高的Y

3、Q14菌株進(jìn)行了鑒定，經(jīng)16S rDNA序列分析，確定YQ14菌株為蠟樣芽胞桿菌（Bacillus cereus.）。
　　2.通過單因素和響應(yīng)面法明確了YQ14菌株對煙嘧磺隆的最佳降解條件。通過單因素篩選表明:YQ14菌株最適合的培養(yǎng)基為LB培養(yǎng)基和培養(yǎng)基Ⅲ;最適合的煙嘧磺隆初始濃度為2～5 mg/L;最適合的降解溫度為30℃;最適宜的接種量為1×108CFU/mL;通過響應(yīng)面法對溫度、煙嘧磺隆初始濃度和接種量進(jìn)行優(yōu)化，得到煙嘧

4、磺隆降解的最優(yōu)條件為:培養(yǎng)溫度33.58℃煙嘧磺隆初始濃度為2.87 mg/L、接種量1.39×107 CFU/mL。
　　3.對YQ14菌株進(jìn)行發(fā)酵條件優(yōu)化，確定YQ14菌株的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基為:玉米粉1％、蛋白胨0.5％、MgSO4·7H2O0.01％，最適培養(yǎng)條件為:pH7.5，種齡12h，接種量10％，裝瓶量30 mL/250 mL。
　　4.在發(fā)酵培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，大量培養(yǎng)菌株，選擇麥麩作為載體，制成YQ14菌株的微生