入射照明激光對(duì)激光掃描共聚焦顯微鏡成像影響的研究.pdf

1、激光掃描共聚焦顯微鏡(Laser Scanning Confocal Microscopy)是研究微細(xì)結(jié)構(gòu)的有效技術(shù)手段和必備的大型科學(xué)儀器，在生物和工業(yè)檢測(cè)領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。該系統(tǒng)采用精密針孔濾波技術(shù)，使得只有處于焦平面位置上的信息能夠被探測(cè)，最大限度地抑制了非聚焦平面的雜散光，具有很高的成像分辨率和信噪比;同時(shí)系統(tǒng)沿Z軸方向可以實(shí)現(xiàn)無(wú)損光學(xué)斷層掃描，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)較厚樣本的三維成像
　　本文通過(guò)理論建模并對(duì)模型進(jìn)行了計(jì)算分析，最

2、后搭建LSCM實(shí)驗(yàn)光路進(jìn)行驗(yàn)證，來(lái)說(shuō)明入射激光對(duì)共聚焦顯微鏡成像質(zhì)量的影響。
　　理論建模是根據(jù)Richards-Wolf以及P.T(o)r(o)k的矢量衍射積分，建立了一套LSCM在N種介質(zhì)N-1層界面中照明點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)(point spread function，PSF)的模型，并且計(jì)算得到零層和兩層界面兩種實(shí)際情況中的PSF。
　　根據(jù)理論建模的內(nèi)容，通過(guò)改變?nèi)肷浼す馄駪B(tài)、入射激光充溢系數(shù)βG以及改變探測(cè)的深度，得到了

3、點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的計(jì)算結(jié)果。結(jié)果表明，當(dāng)采用圓偏振光和線(xiàn)偏振光入射的時(shí)候，圓偏振光在一個(gè)方向的分辨率要優(yōu)于線(xiàn)偏振光，但是在相垂直的另一個(gè)方向上就略弱于線(xiàn)偏振光的分辨率。圓偏振光PSF在xy平面關(guān)于焦點(diǎn)旋轉(zhuǎn)對(duì)稱(chēng)，將得到比較好的成像質(zhì)量。當(dāng)入射激光的充溢系數(shù)βG越小的時(shí)候，顯微鏡的分辨率越好。
　　根據(jù)共聚焦顯微鏡原理圖搭建了LSCM光路，通過(guò)改變?nèi)肷浼す鉅顟B(tài)的方式，驗(yàn)證了影響共聚焦顯微鏡成像質(zhì)量的這些因素，結(jié)果表明圓偏振光入射成像質(zhì)量?jī)?yōu)于