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文檔簡介
1、背景與目的:
乙醇作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制劑,可抑制大腦皮層的活動,使皮質(zhì)下中樞的興奮失去控制,從而誘發(fā)腦功能紊亂,導(dǎo)致機體神經(jīng)行為功能的改變,造成學(xué)習(xí)、記憶認知、運動協(xié)調(diào)等多種行為功能障礙。因此乙醇的過量飲用可嚴重影響醉酒者的身心健康,導(dǎo)致交通事故、家庭社會暴力等一系列不良后果,給社會和家庭帶來極大的危害。但目前國內(nèi)外研究多集中在慢性乙醇中毒對中樞神經(jīng)系統(tǒng)帶來的不良影響,對急性乙醇中毒的研究報道較少。本研究選取大鼠給予不同劑量
2、的乙醇灌胃后建立急性乙醇中毒動物模型,采用HE染色及免疫熒光法結(jié)合激光共聚焦觀察乙醇中毒后海馬形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化情況,探討急性乙醇中毒所致病變基礎(chǔ)及其可能作用機制,為今后的相關(guān)研究提供科學(xué)依據(jù)。
方法:
1.SD大鼠,雌雄不限,體重250g左右,隨機分組,酒精濃度為56%(v/v)(紅星二鍋頭)2.分為四個劑量組:對照組、低劑量(4ml/kg)、中劑量組(8ml/kg)、高劑量組(16ml/kg)。分別處理1h、2h、4
3、h、8h、12h。對照組給予相應(yīng)體積的生理鹽水,制作低、中、高劑量急性乙醇中毒模型。3.采用HE染色法觀察急性乙醇中毒后海馬形態(tài)的變化情況4.采用免疫熒光法觀察不同時間段急性乙醇中毒后海馬神經(jīng)元 NeuN的表達5.利用激光共聚焦觀察不同時間段急性乙醇中毒后經(jīng)過熒光雙染的NeuN及DAPI的海馬神經(jīng)元表達
結(jié)果:
1. HE染色結(jié)果顯示,給予大鼠不同濃度乙醇灌胃后,與對照組相比,乙醇組中齒狀回神經(jīng)元的胞體厚度未發(fā)生明顯
4、的變化,但其神經(jīng)元細胞的排布卻表現(xiàn)為不同程度的改變。大鼠給予4 ml/kg乙醇灌胃1 h及2 h后齒狀回神經(jīng)元細胞并未發(fā)生明顯的改變,作用4h后可見齒狀回內(nèi)顆粒細胞排布呈現(xiàn)輕微的疏松狀,作用至8 h時,顆粒細胞的排布已恢復(fù)至正常結(jié)構(gòu);8 ml/kg和16 ml/kg乙醇處理組可見部分齒狀回顆粒細胞胞體出現(xiàn)明顯水腫,給予大鼠乙醇灌胃2h后,8 ml/kg乙醇處理組與對照組相比無明顯差別,4 h時可見齒狀回神經(jīng)元細胞出現(xiàn)明顯排列紊亂、疏松,
5、細胞間隙增大,8 h時其細胞排布結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)至正常狀態(tài),至12 h時,齒狀回內(nèi)細胞的密度已與對照組相當;而16 ml/kg乙醇處理在灌胃后2h即可觀察到齒狀回細胞結(jié)構(gòu)的改變,表現(xiàn)為細胞密度的降低,細胞間隙的增大等,4 h時乙醇對齒狀回內(nèi)神經(jīng)元細胞的損傷進一步加重,與對照組相比,可見細胞數(shù)目明顯減少,細胞排布的緊密度降低,灌胃8h后,在齒狀回內(nèi)可觀察到明顯的空隙結(jié)構(gòu),神經(jīng)元細胞排布分散零亂,其層狀結(jié)構(gòu)已完全消失,由此可知高濃度的乙醇可導(dǎo)致
6、齒狀回神經(jīng)元細胞致密結(jié)構(gòu)出現(xiàn)嚴重損傷,至灌胃12 h時,齒狀回顆粒細胞排布結(jié)構(gòu)尚未恢復(fù)至正常。
2.免疫熒光結(jié)果顯示,與對照組相比,乙醇處理組中齒狀回神經(jīng)元 NeuN熒光表達強度減弱。乙醇灌胃1 h后,4 ml/kg、8 ml/kg及16 ml/kg乙醇處理組大鼠齒狀回及海馬CA3及CA4中NeuN的表達量即表現(xiàn)為不同程度的減少;作用2 h時,大鼠齒狀回及海馬CA3及CA4神經(jīng)元中NeuN的熒光強度進一步減弱,提示酒精可導(dǎo)致神
7、經(jīng)元細胞密度的降低,在形態(tài)結(jié)構(gòu)上表現(xiàn)為齒狀回內(nèi)顆粒細胞間隙增大,細胞排列疏松、紊亂,海馬CA3及CA4錐體細胞數(shù)目減少,分布散亂;至4 h時,8 ml/kg及16 ml/kg乙醇處理組中NeuN表達量持續(xù)減少,僅可在齒狀回及海馬CA3及CA4局部區(qū)域內(nèi)觀察到NeuN表達分布,可見大量的空隙樣結(jié)構(gòu)分布,上述結(jié)果提示齒狀回顆粒細胞的層狀排布結(jié)構(gòu)受損嚴重,海馬內(nèi)錐體細胞損傷程度進一步加劇。至8 h時,4 ml/kg乙醇處理組NeuN熒光強度已
8、與對照組相當,而中高劑量組在乙醇灌胃后12 h時其齒狀回NeuN表達尚未恢復(fù)至正常水平,且細胞排布仍呈現(xiàn)為松散態(tài)。
3.激光共聚焦NeuN+dapi表達結(jié)果可知,neun標記神經(jīng)元核,DAPI可標記所有細胞的胞核,乙醇灌胃1 h后,4 ml/kg、8 ml/kg及16 ml/kg乙醇處理組大鼠齒狀回及海馬CA3及CA4中NeuN的表達開始減弱;作用2 h時,大鼠齒狀回及海馬CA3及CA4神經(jīng)元中NeuN的表達進一步減弱,形態(tài)結(jié)
9、構(gòu)上出現(xiàn)齒狀回內(nèi)顆粒細胞間隙增大,細胞排列疏松、紊亂,海馬CA3及CA4錐體細胞數(shù)目減少,分布散亂;至4 h時,8 ml/kg及16 ml/kg乙醇處理組中NeuN熒光表達量較弱,僅可在齒狀回及海馬CA3及CA4局部區(qū)域內(nèi)可觀察到NeuN表達分布,齒狀回顆粒細胞的層狀排布結(jié)構(gòu)明顯受損,可見空隙樣結(jié)構(gòu)分布,海馬內(nèi)錐體細胞損傷程度進一步加劇,可見少數(shù)細胞表現(xiàn)為空泡樣結(jié)構(gòu)。至8 h時,4 ml/kg組NeuN熒光強度已與對照組無明顯差別,而中
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