奶粉中含硫氨基酸的分析與檢測(cè).pdf

1、奶粉是我國(guó)主要乳制品之一，所占比例達(dá)到三分之一。奶粉中蛋白質(zhì)含量約17％-25％，含有全部必需氨基酸，是一種高效吸收的全價(jià)蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)的含量高低是奶粉質(zhì)量好壞的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)之一。隨著生活質(zhì)量的提高，人們的健康意識(shí)越來(lái)越強(qiáng)，對(duì)乳制品的需求也越來(lái)越高。近年來(lái)，奶粉摻假事件使得蛋白質(zhì)含量檢測(cè)的經(jīng)典方法----凱式定氮法已不能滿(mǎn)足要求。蛋白質(zhì)基本組成單位氨基酸組分的檢測(cè)成為新型蛋白質(zhì)檢測(cè)方法，而這方面報(bào)道甚少。奶粉中含硫氨基酸含量較低，且不易準(zhǔn)確

2、測(cè)定。酸水解中部分損失，堿水解中完全損失，一般用過(guò)甲酸氧化水解法處理，但此法操作繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)。除此外，巰基還原劑如巰基乙酸(TGA)、巰基乙醇(BME)和二硫蘇糖醇(DTT)也可用來(lái)保護(hù)含硫氨基酸。高效液相色譜法(HPLC)是目前氨基酸檢測(cè)使用最普遍的方法，4-氯-3，5-二硝基三氟甲苯(CNBF)是一種新型衍生試劑，本文用CNBF作為衍生劑，產(chǎn)用HPLC法來(lái)分析檢測(cè)奶粉中含硫氨基酸。
　　本文通過(guò)酸水解法，氧化水解法，TGA、B

3、ME及DTT作用下酸水解法五種前處理方法來(lái)水解奶粉，經(jīng)HPLC法對(duì)其含硫氨基酸含量進(jìn)行分析與檢測(cè)，建立奶粉中含硫氨基酸含量檢測(cè)的最佳前處理?xiàng)l件。本文Met、(Cys)2、Cys最低檢出限(LOD)分別為0.7、0.3、0.5μmol/L，最低定量限(LOQ)均為10μmol/L，在10-1000μmol/L范圍內(nèi)，線(xiàn)性良好，靈敏度高。研究表明：⑴30mg奶粉在3mL6 mol/L HCl(含0.1％苯酚)，110℃條件下水解20h后，測(cè)

4、定奶粉中Met含量為0.43g/100g，回收率95％，(Cys)2含量0.06g/100g，回收率60％，此法能準(zhǔn)確測(cè)定Met含量，但(Cys)2損失大。⑵氧化水解后，奶粉中Met、(Cys)2含量分別為0.44g/100g、0.15g/100g，回收率均達(dá)到95％，此法可準(zhǔn)確檢測(cè)奶粉中含硫氨基酸，與酸水解相比，Met含量一致，(Cys)2為酸水解的2.5倍。⑶最佳TGA濃度為0.9％，最佳BME濃度4.0％，但因4.0％BME作用下

5、Cys回收率極低，選擇0.9％TGA作用于奶粉酸水解，經(jīng)檢測(cè)其Met含量為0.38g/100g，(Cys)2含量為0.15g/100g，前者回收率102％，后者55％左右，此法(Cys)2檢測(cè)含量與前者方法一致，但Met含量有所減小。⑷最佳DTT作用條件為1mL水解液中加入0.1mol/L DTT100μL，室溫反應(yīng)1h。測(cè)得奶粉中Met含量為0.37g/100g，(Cys)2含量為0.14g/100g，與0.9％ TGA結(jié)果一致，回收