人瘢痕疙瘩成纖維樣(間充質(zhì))干細(xì)胞生物學(xué)特性鑒定.pdf

1、目的:探討人體瘢痕疙瘩(keloid,KD)中是否存在多能間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs),并對(duì)其進(jìn)行分離培養(yǎng)及初步研究其生物學(xué)特性。
　　 方法:采用兩步酶消化法從人的瘢痕疙瘩中分離培養(yǎng)瘢痕疙瘩來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞(keloid-derivedmesenchymalstemcell,KMSCs),觀察其貼壁、增殖等生物學(xué)特性;應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞的表面標(biāo)志CD29、CD34、CD44、CD45及CD90的表達(dá)以及檢測(cè)細(xì)胞

2、周期;通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)該細(xì)胞CK19、Oct4、波形蛋白的表達(dá)情況;逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(realtimepolymerasechainreaction,RT-PCR)檢測(cè)細(xì)胞Oct4mRNA的表達(dá)情況;實(shí)驗(yàn)同時(shí)對(duì)該細(xì)胞進(jìn)行成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞以及成脂細(xì)胞多向誘導(dǎo)分化能力鑒定。
　　 結(jié)果:從人的瘢痕疙瘩中分離出間充質(zhì)樣干細(xì)胞,原代細(xì)胞形態(tài)多為長(zhǎng)梭形或多角形,呈放射狀集落樣生長(zhǎng),體外培養(yǎng)連續(xù)傳代后,形態(tài)較為均一,排列不規(guī)則,

3、以梭形為主;細(xì)胞生長(zhǎng)曲線顯示細(xì)胞開(kāi)始1-2天生長(zhǎng)較慢,從第三天左右細(xì)胞生長(zhǎng)增快,到第8天左右生長(zhǎng)進(jìn)入平臺(tái)期;細(xì)胞周期顯示細(xì)胞群中有65.18±3.96％的細(xì)胞處于G0/G1期,S期的細(xì)胞占6.92±1.82％,G2/M的細(xì)胞占27.90±2.19％;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表型分析表明,該細(xì)胞均高表達(dá)CD29、CD44、CD90等間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志、不表達(dá)CD34、CD45等造血干細(xì)胞表面標(biāo)志,且原代及P3代細(xì)胞無(wú)明顯變化;RT-PCR法檢