功能化的第五代樹狀大分子包裹納米金顆粒的制備及其在基因傳遞中的應(yīng)用.pdf

1、隨著癌癥以及其它基因類疾病發(fā)病率的升高，基因治療在癌癥以及其它疾病治療中的應(yīng)用引起人們的廣泛關(guān)注。基因治療(genetherapy)是指將外源正?；?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達(dá)到治療目的的一種治療手段?；蛑委煹年P(guān)鍵在于通過安全、高效的載體將治療基因傳遞到靶細(xì)胞。基因傳遞常用的載體一般分為病毒載體和非病毒載體。雖然病毒載體的基因傳遞效率高，但它的免疫源性、致癌性和細(xì)胞毒性較高等缺陷限制了其在體內(nèi)基因治療中的

2、應(yīng)用。近年來，研究者開始致力于探索非病毒載體在基因治療中的應(yīng)用潛能。
　　在本研究中，我們報道了兩類基于第五代樹狀大分子(G5.NH2)的新型非病毒基因傳遞載體，分別是乙?；揎椀牡谖宕鷺錉畲蠓肿影{米金顆粒(AuDENPs-Ac)和聚乙二醇修飾的第五代樹狀大分子包裹納米金顆粒(AuDENPs-PEG)。通過核磁、紫外分光光度計以及透射電鏡對材料的物理化學(xué)特征進(jìn)行表征;瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)確定載體完全結(jié)合基因的N/P;水動力粒徑大

3、小和電勢正負(fù)的測量初步研究在不同的N/P下，載體/基因是否形成了有利于進(jìn)入細(xì)胞的復(fù)合物。綠色熒光蛋白和熒光素酶的表達(dá)用來研究載體傳遞質(zhì)粒DNA的效率;Westernblot技術(shù)用來研究載體傳遞Bcl-2-siRNA的效率;能夠持續(xù)表達(dá)EGFP的Hela細(xì)胞用來研究材料傳遞ssDNA的效率。共聚焦顯微鏡技術(shù)以及流式細(xì)胞技術(shù)也被用來研究載體/基因復(fù)合物的細(xì)胞內(nèi)吞效率。
　　結(jié)果表明:AuDENPs-Ac能夠顯著地降低AuDENPs的細(xì)

4、胞生物學(xué)毒性，但不影響AuDENPs的基因傳遞效率。AuDENPs-PEG不僅能高效地壓縮pDNA、siRNA和ssDNA形成有利于基因傳遞的復(fù)合物，而且顯著地提高了G5.NH2的基因傳遞效率。在氯金酸與樹狀大分子比相同的條件下，低分子量的聚乙二醇(mPEG，分子量為2000)修飾的AuDENPs比高分子量的mPEG(分子量為5000)修飾的AuDENPs傳遞質(zhì)粒DNA的效率高。同時，在N/P=5時，分子量為2000的mPEG修飾的Au