微生物轉(zhuǎn)化法制備γ-癸內(nèi)酯的研究.pdf

1、γ-癸內(nèi)酯是香精香料行業(yè)廣泛應(yīng)用的一種調(diào)香原料，利用生物法生產(chǎn)的γ-癸內(nèi)酯產(chǎn)品更為天然、安全，是目前的發(fā)展趨勢。本文以從自然界篩選可轉(zhuǎn)化蓖麻油生成γ-癸內(nèi)酯的酵母菌株 J1為出發(fā)菌株，利用原生質(zhì)體紫外誘變技術(shù)提高γ-癸內(nèi)酯的轉(zhuǎn)化率，研究了微生物二次轉(zhuǎn)化法制備γ-癸內(nèi)酯的新工藝以及γ-癸內(nèi)酯的提取及檢測方法，主要結(jié)論如下。
　　 1.從桃樹林土壤及桃子表面篩選能夠利用蓖麻油生成γ-癸內(nèi)酯的菌種，經(jīng)初篩、復(fù)篩確定酵母菌J1和J2具有

2、分解蓖麻油的能力，與保藏的釀酒酵母、解脂假絲酵母、耐酒精酵母進行比較，酵母菌J1對蓖麻油的轉(zhuǎn)化率最高，經(jīng)初步鑒定，J1為子囊菌綱、酵母目、酵母科、畢赤酵母屬。
　　 2.以J1為出發(fā)菌株進行原生質(zhì)體紫外誘變，確定了原生質(zhì)體形成和誘變的最佳條件：菌齡16 h，酶解濃度1％，酶解時間50 min，酶解溫度28℃，15 W紫外燈，30cm處照射25 min。經(jīng)初篩和復(fù)篩，得到γ-癸內(nèi)酯高產(chǎn)菌株M6，該菌株遺傳穩(wěn)定性良好，最適生長溫度為

3、30℃，最適生長pH為5-6。利用該菌株進行發(fā)酵，以蓖麻油為底物，γ-癸內(nèi)酯產(chǎn)量達到1.25g/L，比出發(fā)菌株提高了28.8％。
　　 3.確定了一次轉(zhuǎn)化菌株M6的發(fā)酵培養(yǎng)基為：蓖麻油4％，葡萄糖15 g/L，酵母浸出汁2.5g/L，蛋白胨2.5g/L，KH2PO41.2g/L，MgSO40.3g/L，Na2HPO41.0g/L，表面活性劑0.4％；培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度30℃，接種量10％，裝液量50 mL/250 mL，搖床轉(zhuǎn)

4、速200 r/min，起始pH6.0。二次轉(zhuǎn)化中，按8％接種量，接種一次轉(zhuǎn)化12 h的轉(zhuǎn)化液進行二次轉(zhuǎn)化試驗。
　　 4.分別以丙酮、乙酸乙酯、四氯化碳、正己烷及乙醚等不同有機溶劑對γ-癸內(nèi)酯進行提取，結(jié)果表明，正己烷的萃取效果最好，含量達到1.58g/L。超臨界萃取的最佳條件為：溫度30℃，壓力10MPa，時間1.5 h，此時γ-癸內(nèi)酯產(chǎn)量達到2.98g/L，比有機溶劑萃取法提高了88.6％，轉(zhuǎn)化率達到30.5％，該方法更為安