表面等離子體子共振生物傳感技術(shù)檢測(cè)生物分子的研究.pdf

1、表面等離子體子共振(Surface Plasmon Resonance，SPR)技術(shù)對(duì)于生物分子相互作用分析來說是最有效的方法之一，尤其是它的表面敏感應(yīng)答、無需標(biāo)記檢測(cè)和實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)動(dòng)態(tài)的優(yōu)點(diǎn)，為生物分子之間相互作用的專一性、親和性、動(dòng)力學(xué)關(guān)系和分析復(fù)雜樣品中目標(biāo)分子等提供了豐富的信息。本文通過文獻(xiàn)綜述和實(shí)驗(yàn)研究?jī)蓚€(gè)方面闡述了SPR傳感器的原理和應(yīng)用，并建立了三種SPR傳感器檢測(cè)不同類型生物分子的靈敏分析方法。
　　 本論文文獻(xiàn)

2、綜述部分詳細(xì)闡述了SPR的原理及研究背景和意義，并且對(duì)SPR的原理、傳感器類型、應(yīng)用及最新進(jìn)展進(jìn)行了綜述。
　　 本論文實(shí)驗(yàn)研究部分共包括三個(gè)主要內(nèi)容:1、在SPR傳感器上建立小分子物質(zhì)—青霉素的檢測(cè)方法。利用波長(zhǎng)檢測(cè)型SPR生物傳感器檢測(cè)青霉素，其主要原理依據(jù)是:青霉素屬于β-內(nèi)酰胺環(huán)類抗生素，在強(qiáng)酸環(huán)境下分解產(chǎn)生青霉胺，然后引入膠體金與青霉胺結(jié)合，既可以增加青霉胺的質(zhì)量也可增強(qiáng)SPR生物傳感器的共振信號(hào)，實(shí)現(xiàn)靈敏檢測(cè)。由于S

3、PR傳感器檢測(cè)小分子物質(zhì)具有一定的挑戰(zhàn)性，而本方法對(duì)于部分小分子物質(zhì)具有有效的檢測(cè)能力;2、利用SPR傳感器研究凋亡酶caspase-3的堿基差異變化，使用波長(zhǎng)檢測(cè)型SPR生物傳感器應(yīng)用到凋亡酶caspase-3DNA寡核苷酸片段的堿基錯(cuò)配研究。為了增強(qiáng)檢測(cè)靈敏度，Taq DNA聚合酶被用來作為信號(hào)放大的工具。Taq DNA聚合酶在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中用來與DNA模板—引物復(fù)合物結(jié)合，最后實(shí)現(xiàn)鏈的延伸，而在SPR生物傳感器檢測(cè)過程中，可用它

4、來鑒別寡核苷酸鏈的差異。本研究不僅優(yōu)化酶的反應(yīng)條件提高了檢測(cè)的靈敏度，同時(shí)也是對(duì)固相表面的酶反應(yīng)條件做相應(yīng)的摸索;3、在SPR傳感器上檢測(cè)肝癌細(xì)胞HepG2。采用SPR成像裝置與微流控芯片相結(jié)合，建立了有效地捕獲肝癌細(xì)胞HepG2并檢測(cè)其濃度的方法。檢測(cè)過程中，利用癌胚抗原抗體來捕獲HepG2，為了使癌胚抗原抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)充分暴露出來，引入蛋白A(Protein A)來連接抗體重鏈。有效地捕獲癌細(xì)胞并檢測(cè)其濃度或者數(shù)目，對(duì)于抗癌藥物