基于酶和核酸適體的生物傳感器的研究.pdf

1、針對(duì)惡性腫瘤等疾病早期檢測(cè)方法操作復(fù)雜、價(jià)格昂貴、靈敏度與準(zhǔn)確性尚需提高的問題，研制基于核酸適體的靈敏、快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的生物傳感器用于腫瘤的早期診斷。采用絲網(wǎng)印刷電極、納米粒子、生物條形碼等信號(hào)放大技術(shù)，制備超靈敏的腫瘤標(biāo)志物生物傳感器，提高檢測(cè)靈敏度。將納米技術(shù)與DNA適體技術(shù)相結(jié)合，對(duì)電極表面進(jìn)行修飾，制備成探針，應(yīng)用于腫瘤標(biāo)志物抗原的識(shí)別。適體能與多種目標(biāo)物質(zhì)高特異性、高選擇性的結(jié)合，利用DNA適體的開關(guān)技術(shù)，建立了高靈敏度測(cè)定

2、小分子化合物和蛋白質(zhì)的適體生物傳感器。本論文共分為五章：
　　 第一章，概述了DNA生物傳感器的設(shè)計(jì)原理、分類，介紹了DNA生物傳感器的研究現(xiàn)狀以及適體傳感器的研究進(jìn)展。
　　 第二章，利用絲網(wǎng)印刷技術(shù)，將硫堇混合加入油墨中，優(yōu)化電極制備的溫度、固化時(shí)間等條件，制備成硫堇摻雜絲網(wǎng)印刷電極。將探針ssDNA固定在該電極上，通過與靶ssDNA及修飾了辣根過氧化物酶（HRP）的信號(hào)ssDNA雜交，形成雙鏈結(jié)構(gòu)。利用HPR催化H

3、2O2氧化鄰氨基酚（OAP）生成2-氨基酚嗯嗪（AP），直接檢測(cè)靶DNA。檢測(cè)乙肝病毒B（HBV）基因片斷的線性范圍為:1.00×10-12mol·L-1～1.20×10-11mol.L-1，檢測(cè)限為7.8×10-13 mol·L-1（3σ）。
　　 第三章，基于適體的結(jié)構(gòu)從DNA/DNA轉(zhuǎn)變?yōu)镈NA/目標(biāo)復(fù)合物和適體酶增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光，構(gòu)建了一種檢測(cè)凝血酶的高靈敏的光化學(xué)傳感器。凝血酶適體先固定到磁珠上，之后與血晶素適體雜交。在凝

4、血酶存在下，血晶素適體游離到溶液中并與血晶素特異性結(jié)合形成適體酶，該適體酶能增強(qiáng)魯米諾.雙氧水體系的發(fā)光。通過檢測(cè)凝血酶濃度與發(fā)光強(qiáng)度之間的關(guān)系，得到檢測(cè)凝血酶的線性范圍：5.0×10-12mol·L-1～5.0×10-11mol·L-1，檢測(cè)限為3.1×10-12mol·L-1（3σ）。
　　 第四章，基于生物條碼技術(shù)和陽(yáng)極溶出伏安法（ASV）提出了一種雙適體同時(shí)檢測(cè)腺苷和凝血酶的電化學(xué)傳感器。通過Au-S鍵在金電極表面固定一

5、條巰基修飾的雙適體探針DNA，腺苷適體與其互補(bǔ)鏈雜交，從而CdS固定到電極表面上。當(dāng)腺苷和凝血酶分了存在時(shí)，適體部分發(fā)生彎曲包裹住各自的目標(biāo)分子形成復(fù)雜結(jié)構(gòu)，同時(shí)，連接有CdS納米粒子修飾的金納米粒子就會(huì)從電極表面脫落，進(jìn)入到溶液中。與此同時(shí)，固定到電極表面的凝血酶和凝血酶第二適體特異性作用，從而PbS納米粒子固定到電極表面。采用陽(yáng)極溶出伏安法（ASV）對(duì)金屬硫化物納米粒子進(jìn)行測(cè)定，溶液中腺苷和凝血酶的濃度與各自對(duì)應(yīng)的金屬硫化物的溶出信