聚乙烯基萘納米微球的制備與表征和新型微柱細(xì)胞膜色譜技術(shù)初探.pdf

1、目的：采用乳液聚合法制備聚乙烯基萘（PVN）納米微球及其羧基化PVN納米微球（PVN-COOH），將其用作β2微球蛋白（β2-M）膠乳增強(qiáng)免疫比濁（LETIA）檢測(cè)試劑的新型載體。制備多孔硅膠涂層毛細(xì)管柱，應(yīng)用于微柱細(xì)胞膜色譜（mCMC）。
　　方法：以乙烯基萘（VN）為聚合單體，十二烷基硫酸鈉（SDS）為乳化劑，過(guò)硫酸鉀（KPS）為引發(fā)劑，碳酸鹽緩沖液（C-buffer）為分散相，采用乳液聚合法制備了PVN納米微球。通過(guò)VN與丙

2、烯酸鈉共聚反應(yīng)，制備了PVN-COOH納米微球，考察SDS、VN、KPS、丙烯酸鈉的加入量、分散相的pH值對(duì)兩種納米微球粒徑及 PVN-COOH微球羧基密度的影響。將所制備的微球分別利用掃描電子顯微鏡、紅外光譜、粒徑分析等儀器和方法進(jìn)行結(jié)構(gòu)及形貌的表征。以物理吸附方式將β2-M的抗體固定到PVN及自制聚苯乙烯（PS）微球表面；羧化的PVN、PS微球表面的羧基經(jīng)N-羥基琥珀酰亞胺磺酸鈉（Sulfo-NHS）與1-（3-二甲氨基丙基）-3-

3、乙基碳二亞胺鹽酸（EDC）活化后，將β2-M抗體偶聯(lián)到微球上，制備得到β2-M-LETIA檢測(cè)試劑。自制試劑利用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)、生化分析儀等儀器對(duì)試劑的性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，并與聚苯乙烯微球檢測(cè)試劑比對(duì)，對(duì)所得結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理并分析計(jì)算結(jié)果。
　　微柱細(xì)胞膜色譜（mCMC）柱制備主要包括以下三步，第一步，毛細(xì)管柱的預(yù)處理，第二步，制備多孔硅膠涂層毛細(xì)管柱：以聚乙二醇（PEG）、尿素為制孔劑，正硅酸甲酯（TMOS）為單體，冰醋酸

4、為溶劑，毛細(xì)管柱為載體，通過(guò)水熱反應(yīng)、酸活化、干燥過(guò)程，制備出多孔硅膠涂層毛細(xì)管柱。最后一步為細(xì)胞膜的固定化（本論文中采用兔紅細(xì)胞為模型）。將所制備的毛細(xì)管柱分別利用高效毛細(xì)管電泳儀、掃描電子顯微鏡、熒光倒置顯微鏡進(jìn)行表征。并采用維拉帕米為陽(yáng)性藥物，通過(guò)前沿分析實(shí)驗(yàn)確定不同制備條件所制備微柱的動(dòng)態(tài)吸附容量。統(tǒng)籌分析上述結(jié)果，最終確定mCMC的最優(yōu)制備條件。
　　結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)使用乳液聚合法成功制備了不同粒徑的納米級(jí)PVN、PVN-C

5、OOH微球，通過(guò)優(yōu)化制備條件，可實(shí)現(xiàn)對(duì)微球粒徑的調(diào)控。采用掃描電子顯微鏡觀測(cè)到，制備的微球具有良好的球形度且粒徑分布均勻；紅外光譜證明制備的羧基化微球上含有羧基基團(tuán)。考查出β2-M抗體偶聯(lián)到PVN、PVN-COOH微球上的最佳條件。在上述基礎(chǔ)上研制了以PVN及其 PVN-COOH微球?yàn)檩d體的β2-M-LETIA檢測(cè)試劑。通過(guò)與PS微球?yàn)檩d體的試劑進(jìn)行比較，證明本論文研制的載體微球在靈敏度、線(xiàn)性范圍等方面具有顯著優(yōu)勢(shì)。
　　采用水熱

6、合成法，制備了多孔硅膠涂層毛細(xì)管柱，通過(guò)改變管柱制備配方，可實(shí)現(xiàn)涂層厚度、孔徑、孔徑分布的調(diào)控。通過(guò)對(duì)細(xì)胞膜的熒光標(biāo)記，實(shí)現(xiàn)了mCMC固定相的可視化，通過(guò)熒光強(qiáng)度的分析有效的反應(yīng)了不同制備條件獲得的mCMC管柱中細(xì)胞膜的載量。維拉帕米的前沿分析結(jié)果表明，涂層后的管柱的動(dòng)態(tài)吸附容量較未涂層的管柱顯著提高，且不同配方制備的涂層管柱的動(dòng)態(tài)吸附容量存在顯著差異。綜合對(duì)比熒光強(qiáng)度與維拉帕米的前沿分析數(shù)據(jù)，獲得了最優(yōu)的mCMC管柱制備條件。

7、　　結(jié)論：利用本文采用的方法和條件可以成功制備粒徑大小可控、單分散的PVN、PVN-COOH微球，開(kāi)發(fā)了在納米微球表面偶聯(lián)抗體的方法，自制β2-M-LETIA檢測(cè)試劑。對(duì)制備條件進(jìn)行了考察和優(yōu)化，得到最佳反應(yīng)條件。PVN、PVN-COOH納米微球作為L(zhǎng)ETIA檢測(cè)試劑的載體具有很好應(yīng)用前景。在mCMC方面，與無(wú)涂層的毛細(xì)管相比，多孔硅膠涂層的毛細(xì)管柱可顯著提高細(xì)胞膜載量，提高陽(yáng)性藥物的動(dòng)態(tài)吸附容量。故多孔硅膠涂層毛細(xì)管柱更適用于mCMC