順磁標(biāo)記稀土鰲合物探針的應(yīng)用研究.pdf

1、稀土螯合物氮氧自由基復(fù)合發(fā)光探針是一類(lèi)由發(fā)光物質(zhì)和順磁物質(zhì)共價(jià)結(jié)合而成的化合物。順磁性氮氧自由基對(duì)稀土螯合物的有機(jī)配體及中心離子的發(fā)光具有很好的猝滅作用。氮氧自由基可以捕集小分子還原性物質(zhì)或自由基，在順磁性(paramagnetism)消失的同時(shí)，阻斷了自身對(duì)螯合物發(fā)光的猝滅作用，從而可以利用捕集前后熒光信號(hào)的變化檢測(cè)自由基。在此原理的基礎(chǔ)上本學(xué)位論文利用順磁標(biāo)記稀土螯合物探針Tb3+/cs124-DTPA-TEMPO(1)對(duì)硫中心自由

2、基和酚類(lèi)的響應(yīng)特性，研究發(fā)展了基于順磁標(biāo)記稀土螯合物熒光響應(yīng)的硫中心自由基和酚類(lèi)物質(zhì)的分析新方法，并探索了新型稀土螯合物氮氧自由基復(fù)合探針的設(shè)計(jì)及合成。本研究主要分為三個(gè)部分：
　　 第一部分：參照課題組前期的研究積累，制備、分離提純得到順磁標(biāo)記稀土螯合物Tb3+/cs124-DTPA-TEMPO(1)，考察了其對(duì)硫中心自由基的雙模式響應(yīng)。研究表明，過(guò)氧化物酶HRP(horse radish peroxidase)在雙氧水及苯酚

3、存在時(shí)，能夠快速有效地氧化谷胱甘肽(GSH)產(chǎn)生谷胱甘肽自由基GS·。Tb3+/cs124-DTPA-TEMPO(1)中的TEMPO順磁基團(tuán)對(duì)硫中心自由基呈現(xiàn)出快速、靈敏的熒光和順磁波譜雙模式響應(yīng)，體系的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)與GS·的濃度化學(xué)計(jì)量相關(guān)，在熒光增強(qiáng)的同時(shí)，可以觀測(cè)到EPR(Electron Paramagnetic Resonance))信號(hào)的猝滅?；诖嗽恚疚囊阅M氧化損傷產(chǎn)生GS·的過(guò)程，研究發(fā)展了基于Tb3+/cs124

4、-DTPA-TEMPO(1)熒光響應(yīng)的硫中心自由基分析新方法，方法的檢測(cè)限為1.5 nM，線性范圍10-50 nM。
　　 第二部分：在HRP催化氧化GSH的反應(yīng)中，存在著酚一酚羥基自由基的循環(huán)，這種循環(huán)有著信號(hào)放大的作用。基于此，本文研究發(fā)展了超高靈敏檢測(cè)酚類(lèi)的新方法。對(duì)實(shí)際水樣中2，4-二氯苯酚進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，得回收率為77.4-80.4％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.0—2.2%。為使所建立的分析方法具有高通量的特點(diǎn)，本論文還基于過(guò)氧

5、化氫酶分解反應(yīng)物H202，致使反應(yīng)終止，得到穩(wěn)定熒光強(qiáng)度的特點(diǎn)，以過(guò)氧化氫酶作為反應(yīng)時(shí)間的調(diào)控劑，以達(dá)到批量檢測(cè)的目的，提高了該方法在實(shí)際檢測(cè)領(lǐng)域的實(shí)用性。
　　 第三部分：對(duì)新型順磁標(biāo)記稀土螯合物探針的設(shè)計(jì)及合成進(jìn)行探索。Tb3+/cs124-DTPA-TEMPO的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，由于其激發(fā)波長(zhǎng)位于紫外區(qū)，其在應(yīng)用領(lǐng)域受到限制。為此，設(shè)計(jì)合成可見(jiàn)光激發(fā)的順磁標(biāo)記稀土螯合物探針具有重要意義。本文對(duì)此作了初步的探索，設(shè)計(jì)了探針TEM