基于拉曼光譜生物樣品中乳糖的檢測(cè)及其應(yīng)用.pdf

1、乳糖是廣泛存在的天然雙糖，在微生物培養(yǎng)中經(jīng)常使用，其含量影響著微生物的生長(zhǎng)及代謝，此外乳糖在諸多領(lǐng)域中也應(yīng)用廣泛。因此，生物樣品中乳糖含量的快速測(cè)定意義重大。目前，快速檢測(cè)的方法很多，其中拉曼光譜檢測(cè)具有簡(jiǎn)單、快速、實(shí)時(shí)等許多優(yōu)點(diǎn)。本論文通過(guò)對(duì)乳糖拉曼特征峰的尋找，以結(jié)晶紫為內(nèi)標(biāo)物實(shí)現(xiàn)生物樣品中基于拉曼光譜的乳糖的快速檢測(cè)。同時(shí)，論文也探討了基于表面增強(qiáng)拉曼光譜（SERS）的高靈敏度乳糖檢測(cè)的方法：包括制備出形態(tài)均一、穩(wěn)定性好的銀納米溶

2、膠，尋找適用于乳糖測(cè)定的SERS活性分子探針。
　　本實(shí)驗(yàn)首先開(kāi)發(fā)了內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn)的常規(guī)拉曼光譜法測(cè)定乳糖的含量，該方法實(shí)現(xiàn)了生物樣品中利用普通拉曼光譜快速、特異地檢測(cè)乳糖：即在排除了其他糖類、氮源、維生素和無(wú)機(jī)鹽的干擾的基礎(chǔ)上，利用乳糖拉曼光譜中特征峰（1085cm-1），以內(nèi)標(biāo)結(jié)晶紫的特征峰（1173cm-1）計(jì)算相對(duì)強(qiáng)度，直接快速測(cè)定溶液中的乳糖含量。該方法：乳糖線性范圍為0.028~0.1mol/L，檢出限為0.019mol/L

3、，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）不大于3.38％，向溶液中添加0.05g乳糖測(cè)得回收率為89.64~109.82%。利用該方法測(cè)定實(shí)際樣品，結(jié)果表明：測(cè)得培養(yǎng)基實(shí)際樣品中乳糖的含量為1.01%，回收率在89.81~104.53%，RSD為1.92%；牛奶樣品中乳糖的含量為4.70%，回收率在90.59~110.00%，RSD為2.89%。
　　其次，論文也探討了基于表面增強(qiáng)拉曼光譜（SERS）的高靈敏度檢測(cè)乳糖的方法。首先采用檸檬酸三鈉作

4、為還原劑制備銀納米溶膠，通過(guò)透射電子顯微鏡和粒度分布儀可知，制備出的銀納米溶膠粒度分布均勻、濃度較高、形狀較為規(guī)則，平均粒徑在50nm左右，且該基質(zhì)具有較高的增強(qiáng)效應(yīng)。通過(guò)紫外可見(jiàn)光譜對(duì)反應(yīng)溫度和還原時(shí)間條件研究可知，銀納米溶膠制備的最佳還原溫度為140℃，最佳的還原時(shí)間為15分鐘。其次，選擇了苯甲酸、苯硼酸、對(duì)苯二酚和水楊酸四個(gè)含苯環(huán)芳香烴的化合物作為潛在的乳糖檢測(cè)的SERS探針?lè)肿?，在深入分析各自SERS光譜的基礎(chǔ)上，探討了這4種化