功能型核苷酸用于光化學傳感器的研究.pdf

1、金屬離子,蛋白質(zhì)和核酸由于其與人類生產(chǎn)生活密切相關(guān)而一直是重要的分析對象。環(huán)境中微量的重金屬可以通過食物鏈富集,人通過飲用或食用受重金屬污染的水或食物使體內(nèi)重金屬濃度不斷積累,當其超過一定的限度時,會導致各種疾病。而核酸是生命體基本的遺傳物質(zhì),其堿基的突變會引起多種遺傳性疾病。此外,蛋白質(zhì)是生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ),一些蛋白質(zhì)的含量已經(jīng)成為了臨床診斷一些疾病的重要指標。因此,建立簡單快速檢測金屬離子,蛋白質(zhì)和核酸的分析方法具有重要的生物學意義

2、。光化學生物傳感器由于具有檢測限低,分析速度快,能夠?qū)崿F(xiàn)實時無損分析等諸多優(yōu)點而有廣闊的研究前景。本文發(fā)展了幾種檢測金屬離子,蛋白質(zhì)和特異性基因序列的光化學檢測方法:
　　 (1)結(jié)合特異性DNAzyme與實時熒光定量PCR技術(shù),發(fā)展了一種無標記的鉛離子傳感器。具體方法如下:底物鏈的兩端分別延伸了兩個與引物雜交的區(qū)域,鉛離子催化DNAzyme將底物鏈切割,導致其濃度下降。通過實時熒光定量PCR測定底物鏈的濃度從而達到鉛離子檢測的

3、目的。實驗結(jié)果表明該傳感器對鉛離子從10 nM到5μM有良好的動態(tài)響應(yīng),檢測下限為1 nM。此外,該傳感器對其它一些可能與鉛離子共存的二價離子具有良好的抗干擾能力。
　　 (2)提出了一種新型的均相熒光保護法,基于我們的分析原理,實現(xiàn)了對IgE的快速高靈敏檢測。標記了異硫氰酸熒光素(FITC)的IgE適配體與IgE結(jié)合后,阻礙了抗異硫氰酸熒光素抗體(anti-FITC)與FITC的結(jié)合而產(chǎn)生FITC的熒光,通過檢測熒光強度實現(xiàn)對

4、IgE的定量檢測。實驗結(jié)果表明該方法對IgE從1 nM到40 nM具有良好的線性范圍,檢測下限達到0.1 nM。此外,該傳感器對血清中其它的蛋白質(zhì)具有很好的抗干擾能力。
　　 (3)利用單壁碳納米管的熒光淬滅能力,建立了一種檢測目標:DNA序列的生物傳感器。目標序列與纏繞在SWCNT。表面的標記有熒光團羧基熒光素(FAM)的單鏈DNA雜交,將其從SWCNT表面置換下來,恢復單鏈DNA上FAM的熒光,通過檢測溶液的熒光強度達到檢測