iNOS和VEGF在大鼠牙髓損傷修復(fù)中的表達(dá)和意義.pdf

1、目的：
　　 誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)是機(jī)體合成NO的最主要限速因子之一,可以使體內(nèi)產(chǎn)生高出生理濃度的一氧化氮(nitric oxide,NO)[1]。而NO是細(xì)胞信息傳遞的重要調(diào)節(jié)因子,猶如一把雙刃劍廣泛參與了機(jī)體的生理及病理過(guò)程[2]。
　　 牙齒在受各種刺激如損傷、根折、正畸力作用及可逆性牙髓炎時(shí)可引起牙髓內(nèi)一些細(xì)胞分泌各種多肽類生長(zhǎng)因子,從而增

2、加血管通透性,促進(jìn)血管生成。血管生成是牙本質(zhì)成功修復(fù)的前提,血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)就是其中一種重要的血管生成因子。
　　 牙髓受到各種刺激如創(chuàng)傷等可以使牙髓組織產(chǎn)生一系列的反應(yīng),具有一定的抵御刺激、進(jìn)行自身修復(fù)反應(yīng)的能力,但是牙髓修復(fù)的機(jī)制尚不明確。本研究旨在探討iNOS和VEGF在大鼠牙髓機(jī)械損傷后修復(fù)過(guò)程中的表達(dá)和二者之間的關(guān)系,及不同蓋髓劑直接蓋髓后

3、iNOS表達(dá)變化和分布規(guī)律,為iNOS在牙髓損傷修復(fù)中的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 材料和方法
　　 制備大鼠牙髓機(jī)械損傷模型及氫氧化鈣(calcium hydroxide,CH)和礦物三氧化物凝聚體(mineral trioxide aggregate,MTA)直接蓋髓模型,分別于處理后即刻、1d、3d、7d、14d、21d、28d用4％多聚甲醛心臟灌流固定、取材、脫鈣后常規(guī)石蠟包埋,制備切片,采用免疫組織化學(xué)染色(

4、SABC法)觀察牙髓機(jī)械損傷組牙髓的病理變化及iNOS和VEGF表達(dá)情況,和蓋髓組iNOS的表達(dá)變化,用顯微照相系統(tǒng)及圖像分析軟件測(cè)定各組標(biāo)本陽(yáng)性染色的平均光密度值(optical density,OD)。利用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA)、Pearson相關(guān)分析及配對(duì)t-檢驗(yàn),P<0.05時(shí)有顯著性差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、在正常牙髓組織中iNOS染色呈陰性,開(kāi)髓即刻牙髓中iN

5、OS出現(xiàn)低水平表達(dá),3d組牙髓iNOS出現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),損傷7d后iNOS表達(dá)開(kāi)始減弱,損傷21d后接近正常水平。表達(dá)主要位于中性粒細(xì)胞,成纖維細(xì)胞,成牙本質(zhì)細(xì)胞和少數(shù)血管內(nèi)皮細(xì)胞。損傷后1d、3d、7d、14d iNOS表達(dá)強(qiáng)度與正常對(duì)照有差異。
　　 2、正常牙髓VEGF在血管內(nèi)皮細(xì)胞染色呈強(qiáng)陽(yáng)性,成牙本質(zhì)細(xì)胞染色弱陽(yáng)性或無(wú)著色。牙髓損傷后,VEGF表達(dá)強(qiáng)度呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì),3d時(shí)表達(dá)最強(qiáng),7d略有降低,后逐漸降低至28

6、d時(shí)接近正常水平。表達(dá)主要位于血管內(nèi)皮細(xì)胞,成纖維細(xì)胞,中性粒細(xì)胞,部分成牙本質(zhì)細(xì)胞。損傷后1d、3d、7d、14d VEGF表達(dá)強(qiáng)度與正常對(duì)照有差異。
　　 3、Pearson相關(guān)分析顯示,iNOS與VEGF在牙髓損傷修復(fù)中的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.817,P<0.05)。
　　 4、兩蓋髓組即刻牙髓中iNOS出現(xiàn)低水平表達(dá)并逐漸增強(qiáng),3d時(shí)達(dá)到高峰,7d后表達(dá)開(kāi)始減弱,21-28d接近正常水平。MTA直接蓋髓同一時(shí)

7、點(diǎn)牙髓炎癥程度較CH組低,修復(fù)性牙本質(zhì)形成較CH組多,CH蓋髓后3diNOS表達(dá)顯著強(qiáng)于MTA組。
　　 結(jié)論：
　　 1、大鼠牙髓損傷后,iNOS和VEGF的表達(dá)均呈先增高后降低的趨勢(shì),二者的表達(dá)變化與牙髓早期炎癥狀態(tài)和后期修復(fù)程度有關(guān),iNOS和VEGF的表達(dá)強(qiáng)度具有正相關(guān)性。
　　 2、CH直接蓋髓炎癥及壞死程度較MTA組重,3d時(shí)iNOS顯著高于MTA組,MTA可能通過(guò)某種途徑降低牙髓iNOS活性,使牙髓