表皮葡萄球菌耐氟喹諾酮機(jī)制的初步探討.pdf

1、目的：初步探討耐氟喹諾酮類藥物的表皮葡萄球菌與其主動(dòng)外排蛋白的相關(guān)性，以揭示表皮葡萄球菌對(duì)氟喹諾酮類藥物的耐藥機(jī)制，為臨床耐藥性表皮葡萄球菌的防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：⑴收集臨床分離表皮葡萄球菌菌株，用紙片擴(kuò)散法（Kirby-Bauer）檢測(cè)50株表皮葡萄球菌對(duì)氟喹諾酮藥物的敏感性，篩選出耐藥菌株和敏感菌株，以標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC12228作為對(duì)照；⑵PCR法擴(kuò)增norA基因并測(cè)序。⑶提取表皮葡萄球菌的總RNA，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PC

2、R檢測(cè)表皮葡萄球菌多藥轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白norA的mRNA表達(dá)水平，分析norA在敏感菌株和耐藥菌株中的表達(dá)情況。⑷應(yīng)用熒光法檢測(cè)氧氟沙星在表皮葡萄球菌內(nèi)的累積量，以及加入疊氮化鈉后對(duì)氧氟沙星累積量的影響。 結(jié)果：①表皮葡萄球菌耐藥率較高，80％以上對(duì)一種或一種以上氟喹諾酮類藥物產(chǎn)生耐藥。②50株臨床分離表皮葡萄球菌有48株檢測(cè)到NorA基因，陽性率為98％；對(duì)norA基因啟動(dòng)子區(qū)測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)，5株耐藥菌株中有3株在386位點(diǎn)有堿基C的缺

3、失。③臨床分離耐藥菌株norA基因mRNA表達(dá)水平明顯高于敏感菌株，差異有顯著性（P<0.05）。④氧氟沙星在表皮葡萄球菌內(nèi)的累積量耐藥組低于敏感組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；加入能量抑制劑疊氮化鈉后氧氟沙星在菌體內(nèi)的累積量有所增加，菌株SE40尤為明顯。 結(jié)論：表皮葡萄球菌對(duì)氟喹諾酮類藥物存在明顯的交叉耐藥，臨床醫(yī)生在應(yīng)用該類藥物時(shí)應(yīng)予以注意，減少耐藥菌株的產(chǎn)生；表皮葡萄球菌norA基因的轉(zhuǎn)錄水平的增加使norA基因介