抗VEGF藥物貝伐單抗對視網(wǎng)膜安全性的實驗研究.pdf

1、[背景]目前抗血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）藥物在治療眼部新生血管疾病中的應用具有廣泛前景，而VEGF被證實對神經(jīng)細胞具有保護營養(yǎng)作用，因此玻璃體腔注射抗VEGF藥物對神經(jīng)視網(wǎng)膜是否有潛在的不良作用有待進一步驗證。其中貝伐單抗（Bevacizumab）是近年出現(xiàn)的新型血管生成靶向治療藥物，該藥在眼科疾病中的臨床應用尚未被認證，目前貝伐單抗眼科用藥的安全性研究相對缺乏。
　　 [目的]評估貝伐單抗對成年哺乳動物視網(wǎng)膜神經(jīng)感覺層培養(yǎng)組

2、織的不良反應，進一步明確該藥用于眼科疾病的安全性。
　　 [方法]采用體外培養(yǎng)新鮮豬眼球視乳頭附近視網(wǎng)膜-脈絡膜-鞏膜復合組織的方法，在培養(yǎng)液中給予不同濃度貝伐單抗（不加藥組為對照組A，實驗組B、C、D濃度分別為0.125 mg/ml，0.25 mg/ml，1.25mg/m1），培養(yǎng)12h、24h、48h后，使用光鏡、TUNEL、GFAP抗體免疫熒光、電鏡等方法觀察各組神經(jīng)視網(wǎng)膜的組織形態(tài)、細胞凋亡、超微結構等改變。
　　

3、 [結果]光鏡下觀察，對照組與0.125mg/ml組視網(wǎng)膜各層組織形態(tài)學表現(xiàn)均無異常；0.25mg/ml組和1.25mg/ml組視網(wǎng)膜觀察到神經(jīng)節(jié)細胞腫脹、減少，內(nèi)核層變薄，感光細胞層結構松散等表現(xiàn)。TUNEL檢測凋亡顯示，0.125mg/ml組各時間點的視網(wǎng)膜各層細胞凋亡率較對照組未見明顯升高（P>0.05）；0.25mg/ml（24h、48h）組和1.25mg/ml（12h、24h）組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞層凋亡率明顯升高（P<0.05

4、），其它核層未見明顯升高。GFAP抗體免疫熒光顯示，0.25mg/ml（48h）組，1.25mg（24h、48h）組在內(nèi)叢狀層可見Müller細胞GFAP抗體信號，其余各濃度各時間點的GFAP抗體熒光信號在分布、強度上與對照組無明顯差異。電鏡下觀察，0.125mg/ml組與對照組無明顯差異，0.25mg/ml組，1.25mg/ml組比較對照組可見神經(jīng)節(jié)細胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴張，感光細胞內(nèi)節(jié)線粒體腫脹，線粒體嵴明顯減少甚至缺失。