五指毛桃活性成分的提取與功效研究.pdf

1、五指毛桃是一種藥食同源植物，有悠久的藥食用歷史，保健作用廣為認(rèn)可，在廣東客家地區(qū)廣泛使用，并且大面積種植。隨著五指毛桃相關(guān)產(chǎn)品的深入開(kāi)發(fā)，目前，對(duì)五指毛桃的主要有效成份及其功效的研究尚少，制約了其開(kāi)發(fā)應(yīng)用。本文通過(guò)研究五指毛桃活性物質(zhì)的提取純化工藝、抗氧化功效、抗腫瘤細(xì)胞活性，探討了五指毛桃活性物質(zhì)中主要活性成分的可能分布及其功效的關(guān)系，為五指毛桃在食品和藥品方面的開(kāi)發(fā)提供理論基礎(chǔ)與技術(shù)支撐，主要結(jié)果如下：
　　 （1）五指毛桃

2、活性物質(zhì)提取純化的優(yōu)化工藝為：以提取溶劑、提取時(shí)間、粒度、提取溫度、液料比和乙醇濃度為影響因素，以提取物對(duì)DPPH·清除能力（以清除率表示）為評(píng)價(jià)指標(biāo)，設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)研究五指毛桃的最佳提取工藝。單因素試驗(yàn)結(jié)果表明五指毛桃的最佳提取溶劑為乙醇，最佳提取條件是：提取時(shí)間3 h，提取溫度60℃，提取粒度60目，液料比1:10，乙醇濃度75％。正交試驗(yàn)結(jié)果表明，以提取物對(duì)DPPH·清除能力為評(píng)價(jià)指標(biāo)獲得的提取優(yōu)化工藝參數(shù)為：乙醇濃度7

3、5％，提取粒度60目，提取溫度60℃，提取時(shí)間1 h。
　　 （2）五指毛桃乙醇提取物的抗氧化功效：五指毛桃乙醇提取物對(duì)自由基有一定的清除能力。在一定劑量范圍內(nèi)隨劑量的增加，提取物對(duì)自由基的清除力增強(qiáng)，呈正相關(guān)的量效關(guān)系。分別用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取乙醇提取物，研究不同萃取相對(duì)DPPH·、超氧陰離子（O2-）的清除能力（以清除率表示）、對(duì)羥自由基（·OH）的抑制能力（以抑制單位表示）以及總抗氧化能力（以總抗氧化單位表

4、示）和還原力（以吸光值表示）。結(jié)果表明，對(duì)DPPH·的清除率為：乙酸乙酯萃取相（81.51％）>正丁醇萃取相（61.4％）>水相（41.11％）>乙醚萃取相（19.37％）>石油醚萃取相（15.17％）；對(duì)O2-的清除率為：正丁醇萃取相（36.67％）>乙酸乙酯萃取相（34.86％）>水相（25.17％），石油醚萃取相和乙醚萃取相對(duì)O2-的清除能力檢測(cè)結(jié)果不明顯；對(duì)·OH的抑制能力以水相最強(qiáng)，石油醚萃取相、乙醚萃取相和正丁醇萃取相對(duì)羥自

5、由基的清除能力很弱；還原力的大小為：乙酸乙酯萃取相（1.076）>水相（0.932）>正丁醇萃取相（0.823）>乙醚萃取相（0.658）>石油醚萃取相（0.35）；總抗氧化能力的大小為：正丁醇萃取相（64.34單位/mL）>乙酸乙酯萃取相（44.44單位/mL）>乙醚萃取相（43.00單位/mL）>提取物（17.97單位/mL）>水相（12.21單位/mL）>石油醚萃取相（3.41單位/mL）。五指毛桃乙醇提取物的活性成分主要分布在乙

6、酸乙酯萃取相和正丁醇萃取相中。
　　 （3）應(yīng)用形態(tài)觀察法、MTT法以及流式細(xì)胞儀法測(cè)定五指毛桃提取物及五指毛桃提取物不同萃取相對(duì)Hela細(xì)胞的抑制作用以及對(duì)Hela細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果表明，形態(tài)觀察法和MTT法結(jié)果一致，五指毛桃提取物、乙酸乙酯萃取相、正丁醇萃取相和水相對(duì)Hela細(xì)胞的抑制作用在一定條件下隨時(shí)間和劑量的增加呈正相關(guān)。在0.50～1.50 mg/mL 劑量范圍內(nèi)，對(duì)Hela細(xì)胞的抑制作用大小依次為：乙酸乙酯萃取相