梗死后出血轉化中基質金屬蛋白酶表達及其發(fā)病機制的實驗研究.pdf

1、目的:目前,急性缺血性腦卒中患者可在可視情況下行大血管取栓術,在發(fā)現(xiàn)癥狀后八小時內取栓常可通過血流再通提高患者預后。然而35.8％到46.7％的患者發(fā)生出血性轉化,其中有癥狀的患者占到6.7％～9.9％[1-2]。盡管知道缺血的時間與梗死后出血轉化有直接關系,但是再灌注本身及其更多發(fā)病機制與梗死后出血轉化的關系的研究并不明確[3]。Aigang Lu[4]等研究表明再灌注損傷后基質金屬蛋白酶的激活進一步引起基底膜的破壞是再灌注引起神經損

2、傷的重要因素。因此進一步從缺血時間和再灌注角度進行梗死后出血轉化發(fā)病機制研究可以為臨床預防和治療梗死后出血轉化提供理論依據(jù)。本實驗通過觀察大鼠持續(xù)性腦梗死與腦缺血-再灌注及不同缺血時間腦組織基質金屬蛋白酶-9的表達,TNF-α水平,SOD活力和 MOD含量,來進一步探討缺血和再灌注的損傷機制,從而明確出血性轉化的發(fā)病機理,為臨床預防和治療開辟道路。方法:將健康雄性成年 Wistar大鼠隨機分為3組:即假手術組、缺血-再灌注組、持續(xù)腦梗死

3、組。其中缺血-再灌注組根據(jù)缺血時間不同分為缺血3h灌注24h,缺血6h灌注24h,缺血12h灌注24h,缺血24h灌注24h,缺血48h灌注24h,共5個亞組。對應腦梗死組和假手術組27h,30h,36h,48h,72h,5個亞組。每個亞組12只老鼠。將大鼠用線栓法制成大腦中動脈閉塞模型,缺血再灌注組在個相應缺血時間點將線栓拔出造成缺血再灌注,假手術組手術過程同腦梗死組,但未置入栓線。分別于術后2h進行模型成功評價,并于術后相應時間點進

4、行神經功能障礙評分；用比色法測定手術后不同時點腦組織超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)水平；用放射免疫法測定細胞因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平；進行氯化-2.3.5.三苯基四氮唑(TTC)染色觀察發(fā)生出血轉化的腦組織；用光鏡觀察手術后不同時點腦組織病理改變；用免疫組化方法測定基質金屬蛋白酶-9的表達。結果:缺血-再灌注組和持續(xù)腦梗死組各時點神經功能評分顯著低于假手術組相應時點神經功能評分(P<0.05)；缺血3h灌注

5、24h與對應腦梗死27h.組比較神經功能評分明顯升高(P<0.05)；缺血12h灌注24h,缺血24h灌注24h,缺血48h灌注24h與對應持續(xù)腦梗死36h,48h,72h比較神經功能評分明顯降低；缺血6h灌注24h與對應時間點持續(xù)腦梗死30h比較神經功能評分無明顯統(tǒng)計學差異。缺血-再灌注組組內隨著缺血時間的延長神經功能評分逐漸降低,在缺血48h達到最低。大鼠腦組織TTC染色,正常腦組織呈紅色,梗死灶呈白色,發(fā)生出血轉化的腦組織在白色梗

6、死部位有不同程度紅色,缺血12h灌注24h,缺血.24h灌注24h,缺血48h灌注48h大鼠均有不同程度的出血轉化發(fā)生。缺血-再灌注組和持續(xù)腦梗死組各時點SOD活力顯著低于假手術組相應時點SOD活力(P<0.05):缺血3h灌注24h SOD活力明顯高于腦梗死27h組SOD活力(P<0.05),MDA,TNF-α水平和 MMP-9水平則顯著高于假手術組相應時(P<0.05):缺血12h灌注24h,缺血24h灌注24h,缺血48h灌注24

7、h SOD活力較腦梗死36h,48h,72h組明顯降低,MDA,TNF-α水平和MMP-9水平則相反;缺血6h灌注24h與持續(xù)腦梗死30h比較SOD活力,MDA,TNF-α水平和 MMP-9水平無明顯差異。MMP-9表達與神經功能評分和SOD活力呈明顯負相關(r>-1,P<0.05),MMP-9表達與MDA,TNF-α水平呈明顯正相關(r<1,P<0.05)。光鏡顯示假手術組腦組織結構未見明顯病理改變,腦缺血-再灌注組神經細胞顯著壞死,