支氣管哮喘患者外周血中NK-NKT細胞的測定及意義.pdf

1、一.研究背景： 支氣管哮喘(簡稱哮喘)是由多種炎癥細胞、氣道上皮細胞、及細胞組分參與的慢性變態(tài)反應(yīng)性疾病。哮喘的發(fā)病機制十分復(fù)雜，諸多因素參與其中，迄今為止尚未完全闡明?！靶l(wèi)生學假說”即“Th1/Th2”型細胞失衡學說，是目前公認的最重要的哮喘發(fā)病機制。在此基礎(chǔ)上，研究者又相繼提出了一系列新的觀點來補充和完善哮喘的免疫學理論。天然免疫細胞家族：NK、NKT、DC(樹突狀細胞)、γdT細胞等，由于其可以形成獨特的天然免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，

2、并且對機體免疫應(yīng)答起到重要的調(diào)節(jié)作用，引起學術(shù)界廣泛的關(guān)注。 NK細胞(Naturalkillercells)是一類分布于外周血、脾臟中的大顆粒淋巴細胞，具有免疫監(jiān)視功能被稱為機體免疫防御系統(tǒng)的第一道屏障。NK細胞是重要的免疫調(diào)節(jié)細胞，其免疫調(diào)節(jié)作用是通過分泌IFN-γ、GM-CSF等細胞因子來實現(xiàn)的。NKT細胞(NaturalkillerTcells/CDld-dependentnaturekiller-likeTcells)

3、是近年來發(fā)現(xiàn)的一類新型的淋巴細胞，具有T細胞和NK細胞雙重細胞特性。目前研究顯示：NKT細胞在自身免疫性疾病包括糖尿病、實驗性自身免疫性腦脊髓膜炎、酮誘導(dǎo)的大腸炎等疾病中表現(xiàn)出強大的調(diào)節(jié)能力，影響免疫反應(yīng)類型，使免疫反應(yīng)向Th1或Th2方向轉(zhuǎn)換。因此，通過研究NKT細胞在哮喘發(fā)病中的表達情況，可以進一步探討哮喘的發(fā)病機制，今后為哮喘的診治提供理論依據(jù)。 二.研究目的： 本實驗采用微量全血流式細胞儀對正常人群、哮喘輕度、中

4、度、重度組(共計四組)研究對象，外周血中NK細胞和NKT細胞的含量進行檢測；同時對應(yīng)記錄每個樣本的嗜酸性粒細胞總數(shù)EOSg/l、FEV1占預(yù)計值百分比(FEV1％)；并研究其規(guī)律及與NK細胞和NKT細胞含量的相關(guān)性。通過對上述兩種細胞的研究，深入探討哮喘的發(fā)病機制，為哮喘的診治提供新的理論依據(jù)。 三.研究對象和方法： 1.研究對象的篩選 臨床選取哮喘患者根據(jù)其病情分為輕度組30例，中度組28例，重度組22例及正常

5、對照者30例，共計110例(男59例，女51例)。各組年齡、性別均無顯著性差異，所有研究對象均知情同意，配合研究。 2.實驗方法 實驗1:運用微量全血流式細胞儀檢測外周血中NK細胞含量 實驗2：運用微量全血流式細胞儀檢測外周血中NKT細胞含量 3.實驗結(jié)果分別與EOSg/l總數(shù)、FEV1％進行分析比較 實驗1: (1)所有受試者均抽取靜脈血，進行血常規(guī)五分類檢查，按哮喘輕、中、重度組，正常

6、組分類統(tǒng)計，比較各組別嗜酸性粒細胞總數(shù)(EOSg/l)之間的差異，并與各組相應(yīng)NK細胞含量進行相關(guān)分析。 (2)肺通氣功能測定使用MS-IOSDIGITAL型JAEGER震蕩描記儀(德國)，按規(guī)定校準后測定。記錄哮喘輕度組、中度組、重度組FEV1占預(yù)計值百分比(FEV1％)，并與各組相應(yīng)NK細胞含量進行相關(guān)分析。 實驗2： (1)所有受試者均抽取靜脈血，進行血常規(guī)五分類檢查，按哮喘輕、中、重度組，正常組分類統(tǒng)計，

7、比較各組別嗜酸性粒細胞總數(shù)(EOSg/l)之間的差異，并與各組相應(yīng)NKT細胞含量進行相關(guān)分析。 (2)肺通氣功能測定使用MS-IOSDIGITAL型JAEGER震蕩描記儀(德國)，按規(guī)定校準后測定。記錄哮喘輕度組、中、重度組FEV1占預(yù)計值百分比(FEV1％)，并與各組相應(yīng)NKT細胞含量進行相關(guān)分析。 4.統(tǒng)計學處理 運用SPSS13.0軟件，各組結(jié)果以χ±s表示。兩樣本均數(shù)比較采用兩獨立樣本t檢驗；多組比較采用

8、單向方差分析(One-WayANOVA)；各組間比較采用LSD或Dunnetts法；相關(guān)性檢驗用Pearson相關(guān)分析。檢驗水準a=0.05，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。 四.結(jié)果： 1.應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測外周血中NK細胞含量 正常組(22.54±+4.50)％，輕度組(19.14±5.90)％，中度組(15.64±6.23)％，重度組(14.40±6.21)％。 統(tǒng)計學分析顯示：輕度組、中度組、重

9、度組與正常組比較，均有顯著性差異(F=10.534，P值分別為0.024、0.000、0.000)；中度組、重度組與輕度組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(F=10.534，P值分別為0.033、0.005)；中度組和重度組兩組之間比較無差異性(F=10.534，P=0.487)。 2.應(yīng)用微量全血流式細胞儀檢測外周血中NKT細胞含量 正常組(0.84±0.40)％，輕度組(0.707±0.30)％，中度組(0.49+0.30)

10、％，重度組(0.435±0.22)％。 統(tǒng)計學分析顯示： 中度組、重度組與正常組比較，均有顯著性差異(F=8.724，P值分別為0.000、0.000)；輕度組與正常組比較，無顯著性差異(F=8.724，P值為0.109)；中度組、重度組與輕度組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(F=8.724，P值分別為0.020、0.005)；中度組和重度組之間兩組比較無差異性(F=8.724，P=0.574)。 3.檢測結(jié)果與其對應(yīng)

11、的臨床相關(guān)檢查進行比較 (1)嗜酸性粒細胞總數(shù)為：正常組(0.12±0.091)g/l，輕度組(0.80±0.30)g/l，中度組(0.98±0.21)g/l，重度組(1.075±0.31)g/l。 統(tǒng)計學分析顯示： ①輕度、中度、重度組與正常組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(F=82.274，P值分別為0.000、0.000、0.000)；輕度組與中度、重度組之間比較有顯著性差異(F=82.274，P值分別為0.01

12、7、0.000)；中度組與重度組比較無顯著性差異(F=82.274，P=0.159)。 ②正常組NK細胞含量與嗜酸性粒細胞總數(shù)之間相關(guān)系數(shù)r=0.115，P=0.546；輕度組NK細胞含量與嗜酸性粒細胞總數(shù)之間相關(guān)系數(shù)r=-0.075，P=0.706；中度組NK細胞含量與嗜酸性粒細胞總數(shù)之間相關(guān)系數(shù)r=-0.469，P=0.028；重度組NK細胞含量與嗜酸性粒細胞總數(shù)之間相關(guān)系數(shù)r=-0.464，P=0.039。 ③正常

13、組NKT細胞含量與嗜酸性粒細胞總數(shù)之間相關(guān)系數(shù)r=0.030，P=0.987；輕度組NKT細胞含量與嗜酸性粒細胞總數(shù)之間相關(guān)系數(shù)r=-0.600，P=0.781；中度組NKT細胞含量與嗜酸性粒細胞總數(shù)之間相關(guān)系數(shù)r=-0.480，P=0.024；重度組NKT細胞含量與嗜酸性粒細胞總數(shù)之間相關(guān)系數(shù)r=-0.486，P=0.030。 (2)FEV1％分別為：正常組(101±2.1)％，輕度組(87.9±4.6)％，中度組(70.5±

14、5.7)％，重度組(56.6±1.7)％。 統(tǒng)計學分析顯示： ①哮喘輕度組與中、重度組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(F=295.474，P值分別為0.000、0.000)；中度與重度組之間有顯著性差異(F=295.474，P=0.000)。 ②正常組NK細胞含量與FEV1％之間相關(guān)系數(shù)r=-0.485，P=0.839；輕度組NK細胞含量與FEV1％之間相關(guān)系數(shù)r=-0.131，P=0.505；中度組NK細胞含量與FE

15、V1％之間相關(guān)系數(shù)r=0.713，P=0.000；重度組NK細胞含量與FEV1％之間相關(guān)系數(shù)r=0.653，P=0.002。 ③正常組NKT細胞含量與FEV1％之間相關(guān)系數(shù)r=-0.0751，P=0.554； 輕度組NKT細胞含量與FEV1％之間相關(guān)系數(shù)r=-0.086，P=0.665；中度組NKT細胞含量與FEV1％之間相關(guān)系數(shù)r=0.499，P=0.018；重度組NKT細胞含量與FEV1％之間相關(guān)系數(shù)r=0.545，

16、P=0.013。 五.結(jié)論： 1、哮喘輕度組、中度組、重度組患者外周血中NK細胞含量均低于正常組；中度組、重度組患者外周血中NK細胞含量均低于輕度組；中度組和重度組兩組之間比較NK細胞含量無顯著性差異。 2、哮喘中度組、重度組患者外周血中NKT細胞含量均低于正常組；中度組、重度組外周血中NKT細胞含量均低于輕度組；輕度組和正常組兩組之間比較NKT細胞含量無差異性；中度組和重度組兩組之間比較NKT細胞含量無差異性。

17、 3、各組間外周血嗜酸粒細胞總數(shù)存在顯著性差異：正常組最低，重度組最高。哮喘中度組、重度組NK細胞含量與嗜酸粒細胞總數(shù)之間存在負相關(guān)關(guān)系。哮喘中度組、重度組患者外周血中測定的NKT細胞含量與嗜酸粒細胞總數(shù)之間存在負相關(guān)關(guān)系。 4、各組間FEV1％存在顯著性差異，輕度組最高，重度哮喘組最低。哮喘中、重度組患者外周血中測定的NK細胞含量與FEV1％之間存在正相關(guān)關(guān)系。哮喘中、重度組患者外周血中測定的NKT細胞含量與FEV1％