鐵皮楓斛顆粒對(duì)急性放射損傷小鼠保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究分二個(gè)部分探討鐵皮楓斛顆粒(DCWD)對(duì)急性放射損傷小鼠的保護(hù)作用，重點(diǎn)從免疫調(diào)控的角度探討其相關(guān)機(jī)理。 第一部分：鐵皮楓斛顆粒調(diào)節(jié)小鼠免疫細(xì)胞功能的實(shí)驗(yàn)研究 目的：觀察鐵皮楓斛顆粒(DCWD)對(duì)小鼠免疫細(xì)胞的體外調(diào)節(jié)作用并探討其相關(guān)機(jī)理。 方法：DCWD充分溶解于1640培養(yǎng)基中，制成不同濃度梯度(1mg/ml、100ug/ml、10ug/ml、1ug/ml)。取正常BALB/c小鼠，用MTT法檢測不同濃

2、度的DCWD對(duì)小鼠胸腺和脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)及腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響；用ELISA法檢測脾淋巴細(xì)胞在ConA協(xié)同刺激下產(chǎn)生IL-2含量以及腹腔巨噬細(xì)胞在LPS協(xié)同刺激下產(chǎn)生TNF-α含量。 結(jié)果：(1)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)：1.DCWD濃度達(dá)100ug/ml和1mg/ml時(shí)，明顯促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖，且劑量間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，而低于此濃度。與對(duì)照組比較雖呈現(xiàn)一定趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2．DCWD濃度達(dá)1m

3、g/ml時(shí)，明顯促進(jìn)胸腺細(xì)胞增殖(p<0.01)，而低于此劑量，效應(yīng)指標(biāo)與劑量呈現(xiàn)一定的正相關(guān)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。(2)巨噬細(xì)胞吞噬功能：與對(duì)照組比較，不同濃度的DCWD對(duì)腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能沒有影響(P>0.05)。(3)誘生細(xì)胞因子：1.IL-2：DCWD濃度在10ug/ml時(shí)，明顯促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞生成IL-2(P<0.01)，而低于或高于此濃度，與對(duì)照組比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。2.TNF-α：DCWD濃度在

4、0.1ug/ml時(shí)，生成TNF-α量明顯增加(P<0.05)，而濃度升至1ugl/ml時(shí)，生成TNF-α明顯減少(P<0.01)，隨著濃度進(jìn)一步增高，與對(duì)照組比較，生成TNF-α減少，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，而濃度高達(dá)1mg/ml時(shí)，生成TNF-α進(jìn)一步減少，出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。 結(jié)論：DCWD體外對(duì)小鼠免疫細(xì)胞功能有一定的調(diào)節(jié)作用，它能促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，并調(diào)節(jié)相關(guān)細(xì)胞因子的產(chǎn)生。 第二部分：鐵皮楓斛

5、顆粒對(duì)急性放射損傷小鼠保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究 目的：觀察鐵皮楓斛顆粒(DCWD)對(duì)小鼠急性放射損傷的保護(hù)作用并探討其相關(guān)機(jī)理。 方法：6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組、單純照射組、鐵皮楓斛顆粒(DCWD)組，后者分為4、2g/kg二個(gè)劑量組。采用直線加速器6MV X射線4.0Gy全身單次均勻照射，給藥采用照前連續(xù)灌胃16d，每天一次，照后繼續(xù)給藥至小鼠活殺。觀察小鼠脾質(zhì)比、胸腺質(zhì)比、骨髓DNA含量、外

6、周血CD4<'+>/CD8<'+>比值、脾淋巴細(xì)胞CD4<'+>/CD8<'+>比值、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力、脾淋巴細(xì)胞生成IL-2及腹腔巨噬細(xì)胞生成TNF-α含量等指標(biāo)。 結(jié)果：(1)一般情況：小鼠受照后出現(xiàn)精神不振，反應(yīng)遲鈍，飲食減少，體重增長緩慢等，而給藥組情況明顯改善。 (2)脾質(zhì)比、胸腺比：4.0GyX射線照射后小鼠脾臟和胸腺呈現(xiàn)明顯萎縮(P<0.01)，DCWD能明顯保護(hù)脾臟和胸腺，與單純照射組相比存在明顯差異(P

7、<0.01)；并且高劑量組在胸腺保護(hù)上效果顯著(P<0.05)。 (3)骨髓DNA含量：受照后小鼠骨髓DNA含量明顯下降，與正常對(duì)照組相比差異顯著(P<0.01)，給藥組能明顯提高骨髓DNA含量(P<0.01)，但劑量組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 (4)免疫功能相關(guān)指標(biāo)：1．T細(xì)胞功能亞群：受照后小鼠外周血和脾淋巴細(xì)胞的CD4<'+>/CD8<'+>比值都明顯升高(P<0.01)，主要表現(xiàn)為CD4<'+>％比值明顯

8、升高(P<0.01)及CD8<'+>％比值的明顯下降(P<0.01)，與單純照射組比較DCWD高低劑量組能明顯降低CD4<'+>/CD8<'+>比值(P<0．01)，但劑量組間差異不顯著(P>0.05)。其中外周血淋巴細(xì)胞CD4<'+>％比值高劑量組已與正常對(duì)照組無明顯差異(P>0.05)，高低劑量組的CD8<'+>％比值與單純照射組無明顯差異(P>0.05)；而脾淋巴細(xì)胞CD4<'+>％、CD8<'+>％比值，高低劑量組與單純照射組都

9、存在明顯差異(P<0.01，P<0.05)。2．淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率：經(jīng)4.0Gy照射后小鼠T、B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力呈現(xiàn)明顯下降(P<0.01)，與單純照射組比較，給藥組能明顯提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力(P<0.01)，但劑量組間差異不明顯(P>0.05)。 (5)細(xì)胞因子測定：1．IL-2：與正常對(duì)照組比較，受照后小鼠生成IL-2含量明顯下降(P<0.01)，與單純照射組比較，劑量組小鼠生成IL-2含量明顯增高(P<0.01，P<0.05