CD4+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在SLE免疫病理?yè)p傷機(jī)理中的作用.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種慢性自身免疫性疾病，其特點(diǎn)是自身免疫耐受機(jī)制失衡，免疫功能紊亂，機(jī)體產(chǎn)生大量針對(duì)細(xì)胞核、細(xì)胞漿和細(xì)胞表面成分的自身抗體。免疫耐受機(jī)制失衡包括T細(xì)胞凋亡、B細(xì)胞異常高反應(yīng)性和調(diào)節(jié)性T(regulatory T，Treg)細(xì)胞數(shù)量和功能的紊亂等。Treg細(xì)胞是不同于Th1和Th2細(xì)胞的、具有免疫抑制和調(diào)節(jié)功能的T淋巴細(xì)胞亞群，在免疫耐受中發(fā)揮重要作用。T

2、reg細(xì)胞比例和功能的異常，可導(dǎo)致免疫自身耐受失衡、進(jìn)而引起多種自身免疫性疾病，已成為免疫學(xué)領(lǐng)域研究的重要內(nèi)容。近年來(lái)有很多有關(guān)SLE疾病狀態(tài)Treg細(xì)胞數(shù)量和功能出現(xiàn)變化的研究報(bào)道，但各研究小組的結(jié)果并不一致。Treg細(xì)胞在患者外周血中的比例降低、升高或不變均有報(bào)道；其免疫抑制功能下降或不變也有報(bào)道。這些數(shù)據(jù)的差異可能源于被研究的患者來(lái)源于不同的種族、處于疾病的不同階段、接受了不同的治療、或者研究者定義Treg時(shí)采用不同的表面分子標(biāo)記

3、分類(lèi)所造成的。另外，越來(lái)越多的證據(jù)顯示Treg細(xì)胞是一個(gè)龐大的家族，其中可能包括了功能和機(jī)制不同的細(xì)胞亞群，所以深入針對(duì)其亞群進(jìn)行研究可能有助于理解其在SLE免疫病理機(jī)制中的作用。
　　 可誘導(dǎo)共刺激分子(Inducible Costimulatory，ICOS)是新發(fā)現(xiàn)的表達(dá)于活化T細(xì)胞表面的共刺激分子，屬于CD28/CTLA-4家族。盡管以往大多數(shù)研究認(rèn)為ICOS是一種對(duì)效應(yīng)性T細(xì)胞產(chǎn)生正性共刺激作用的分子；但是，最新的研究

4、認(rèn)為ICOS在免疫耐受中也發(fā)揮重要作用。根據(jù)ICOS在Treg細(xì)胞上的表達(dá)，Treg細(xì)胞可分為CD4+ICOS+Foxp3+T細(xì)胞亞群和CD4+ICOS-Foxp3+T細(xì)胞亞群。其中CD4+ICOS+Foxp3+T細(xì)胞亞群分泌IL-10的能力在所有CD4+T細(xì)胞中居首位，可能參與了多種腫瘤和自身免疫性疾病的病理機(jī)制。
　　 盡管目前普遍認(rèn)為IL-10是一種抗炎癥因子，但已有研究證明在SLE的免疫病理狀態(tài)中，IL-10可能無(wú)法正常

5、的發(fā)揮其抗炎癥及免疫抑制功能；相反在SLE中IL-10可能具有復(fù)雜的前期促炎癥效應(yīng)，如促進(jìn)血小板活化因子的形成、誘導(dǎo)T細(xì)胞的凋亡和促進(jìn)B細(xì)胞的活化等。因此本研究將針對(duì)CD4+ICOS+Foxp3+T細(xì)胞亞群在SLE患者外周血中的比例變化和其參與SLE免疫病理?yè)p傷的可能機(jī)制進(jìn)行探討。
　　 另外，鑒于Treg細(xì)胞在SLE免疫耐受調(diào)節(jié)中的重要作用，如何有效補(bǔ)充功能性Treg細(xì)胞替代性治療成為近年來(lái)探討的熱點(diǎn)。早期有研究發(fā)現(xiàn)：通過(guò)急性

6、饑餓或者卡路里限制能夠減輕自身免疫性疾病的臨床癥狀和病理?yè)p傷，但其具體的機(jī)制目前并不完全清楚。我們知道，在急性饑餓或卡路里限制狀態(tài)下，機(jī)體循環(huán)內(nèi)瘦素水平顯著下降，那么瘦素作為T(mén)reg細(xì)胞增殖的一個(gè)抑制因素，能否在急性饑餓的狀態(tài)下促進(jìn)機(jī)體Treg細(xì)胞的比例上調(diào)？并對(duì)Treg細(xì)胞的免疫抑制功能產(chǎn)生影響？為解決以上提出的問(wèn)題，本實(shí)驗(yàn)分為兩部分：
　　 第一部分、CD4+ICOS+Foxp3+T細(xì)胞在SLE患者外周血中的比例變化及與疾病

7、嚴(yán)重度的關(guān)系
　　 目的：觀察不同疾病狀態(tài)SLE患者外周血CD4+ICOS+Foxp3+T細(xì)胞的比例變化及其與臨床實(shí)驗(yàn)室疾病評(píng)價(jià)指標(biāo)、疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性，分析該亞群細(xì)胞在SLE免疫病理?yè)p傷中的作用和意義。
　　 方法：采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)32名SLE患者、10名RA患者及22名正常對(duì)照人群的外周血中CD4+ICOS+Foxp3+T細(xì)胞、CD4+ICOS-Foxp3+T細(xì)胞和CD4+Foxp3+T細(xì)胞的比例以及這些T細(xì)胞亞

8、群細(xì)胞內(nèi)IL-10和膜表面TGF-β的表達(dá)水平；采用ELISA的方法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組患者外周血漿中IL-10和TGF-β的水平。
　　 結(jié)果：SLE患者外周血中的CD4+ICOS+Foxp3+T細(xì)胞的比例顯著高于RA患者和正常對(duì)照組，且與疾病活動(dòng)指數(shù)(SLEDAI)和血清中抗雙鏈DNA的水平(anti-dsDNA)成正相關(guān)；與血清中補(bǔ)體3(C3)的水平呈負(fù)相關(guān)。另外，SLE患者外周血CD4+ICOS+Foxp3+T細(xì)胞中能夠

9、分泌IL-10的細(xì)胞比例顯著高于CD4+ICOS-Foxp3+T細(xì)胞，其CD4+ICOS+Foxp3+T細(xì)胞在循環(huán)中的比例與患者血漿中IL-10水平成正相關(guān)。
　　 結(jié)論：在SLE患者外周血中比例升高的CD4+ICOS+Foxp3+T細(xì)胞亞群可能在SLE免疫病理?yè)p傷中具有潛在的重要性。由于CD4+ICOS+Foxp3+T細(xì)胞在SLE外周血中的比例受藥物治療的影響較小，分析外周血中CD4+ICOS+Foxp3+T細(xì)胞的比例變化有助

10、于我們?cè)u(píng)價(jià)SLE患者病情的嚴(yán)重度。
　　 第二部分、急性饑餓對(duì)狼瘡傾向小鼠Treg細(xì)胞數(shù)量和功能的影響
　　 目的：探討急性饑餓對(duì)狼瘡傾向小鼠Treg細(xì)胞數(shù)量和功能的影響以及瘦素在急性饑餓影響Treg細(xì)胞比例變化中的作用。
　　 方法：將野生型小鼠(wild type，WT)、瘦素缺陷型小鼠(leptin-deficient B6 ob/ob，ob/ob)、瘦素受體缺陷的小鼠(leptin recepter-de

11、ficient B6 db/db，db/db)和NZB/W小鼠分別分為三個(gè)不同處理組：第一組為空白對(duì)照(正常進(jìn)食)；第二組小鼠急性饑餓48h、但正常供應(yīng)水，同時(shí)腹腔注射0.2mlPBS，一天2次；第三組小鼠急性饑餓48h、但正常供應(yīng)水，同時(shí)腹腔注射溶于0.2mlPBS的瘦素(按小鼠每g體重1μg瘦素計(jì)算)，一天2次。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)循環(huán)中Treg細(xì)胞(CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞)的比例，使用CFSE和ELISA方法檢測(cè)Tre

12、g細(xì)胞在體外抑制效應(yīng)T細(xì)胞增殖和分泌IFN-γ的功能；同時(shí)比較各處理組小鼠體重、脾細(xì)胞數(shù)量和血漿中瘦素水平的變化。
　　 結(jié)果：通過(guò)48小時(shí)的急性饑餓，在WT和NZB/W小鼠血循環(huán)中Treg細(xì)胞比例升高，但可經(jīng)瘦素的補(bǔ)充所逆轉(zhuǎn)；Treg細(xì)胞的免疫抑制功能并無(wú)顯著變化。在ob/ob小鼠和db/db小鼠中，48小時(shí)的急性饑餓對(duì)循環(huán)中Treg細(xì)胞的比例無(wú)顯著影響。對(duì)ob/ob小鼠急性饑餓48h，同時(shí)補(bǔ)充瘦素可降低其循環(huán)中Treg細(xì)胞的