天冬氨酸六肽-丹參素(DD6)的合成及其骨組織靶向藥理效應的初步研究.pdf

1、[目的]
　　 本實驗將嘗試以天冬氨酸六肽為丹參素的骨靶向載體，設(shè)計并合成可能具有骨靶向性的化合物天冬氨酸六肽-丹參素(DD6)，并初步研究其藥理學效應。
　　 [方法]
　　 1.天冬氨酸六肽-丹參素(DD6)的合成實驗本文采用Fmoc固相合成法合成丹參素-天冬氨酸六肽(DD6)，固相載體選擇Wang樹脂，采用手工合成裝置，室溫下氮氣鼓吹保護及攪拌。合成分三部分進行：Fmoc-Asp(OtBu)-O-Wang樹

2、脂的合成，F(xiàn)moc-Asp(OtBu)-[Asp(OtBu)]4-Asp(OtBu)-O-Wang樹脂的合成，DD6的合成。粗品經(jīng)HPLC分離純化后冷凍干燥。結(jié)合HPLC、ESI-MS和1H-NMR對化合物進行鑒定。
　　 2.DD6的親骨性研究實驗以羥基磷灰石(HA)作為實驗模型體外初探DD6的骨靶向性，分別觀察HA對DD6及丹參素(DSU)的吸附特點，并比較它們對HA的親和力強弱，以此說明DD6的親骨性強弱?；衔飳A的親

3、和力用吸附率及吸附量來表示，應用HPLC測定吸附前后DD6或DSU的濃度。
　　 3.DD6對成骨細胞增殖的影響及對骨髓基質(zhì)干細胞(MSCs)成骨分化的影響采用新生大鼠顱蓋骨成骨細胞(rOB)體外培養(yǎng)給藥，觀察DD6和DSU不同濃度和不同時間對rOB增殖的影響，判斷DD6是否具有促成骨細胞增殖作用，同時判斷DSU結(jié)合載體后增殖能力是否變化；體外培養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細胞(MSCs)，直接給藥觀察DD6及DSU對細胞堿性磷酸酶活性的影響，

4、判斷DD6對骨髓基質(zhì)干細胞成骨分化的影響。
　　 [結(jié)果]
　　 最終得100mg凍干品，純度約為91.0％。第一個氨基的導入率可達98.6％，其余氨基酸的縮合率可達97.8％，六肽樹脂與丹參素的縮合率為53.3％，純化回收率為14.1％。結(jié)合HPLC、ESI-MS、1H-NMR結(jié)果驗證其主要成份為DD6。
　　 羥基磷灰石吸附實驗顯示HA對DD6的吸附率隨著DD6濃度的升高而逐漸下降，而其吸附量隨著DD6濃度的

5、升高而升高，當DD6達到一定濃度時其吸附量趨于平衡；HA對DD6吸附率及吸附量隨著HA量的增加而升高。HA對DD6的吸附量約是DSU的60倍。
　　 DD6(2.5×10-7～2.5×10-6M)可促進rOB增殖作用，作用在24h-48h增殖明顯。DSU(5.0×10-7M和2.5×10-6M)作用48 h增殖高峰。DD6促增殖能力有強于DSU的趨勢。
　　 DD6可誘導rMSCs成骨分化分泌ALP，濃度為5.0×10-

6、6M時作用最強，第21天仍有誘導作用。在實驗時間內(nèi)，DD6隨著作用時間的延長誘導作用逐漸增強，作用有較DSU持久的趨勢。
　　 [結(jié)論]
　　 采用本實驗合成方案可成功合成DD6，從第一個氨基酸與樹脂的連接反應開始，總合成率為6.6％。
　　 DD6具有骨靶向性，親骨性強于DSU；六肽載體使得DSU的親骨性得以提高，預示DSU在骨組織中的分布將會增多。
　　 DD6的體外藥效研究證明其具有促成骨細胞增殖及