層孔菌屬藥用真菌阿里紅和木蹄的化學(xué)成分與生物活性研究.pdf

1、阿里紅（Fomes offieinalis Ames）是新疆維吾爾醫(yī)常用的民族藥，為多孔菌科（Polyporaceace）層孔菌屬（Fomes）真菌，主要分布在我國西部和東北。藥理實驗表明具有止咳化痰、抗氧化、增強免疫力作用。為維吾爾藥復(fù)方阿里紅片的主要成分之一，主要用于祛痰平喘。由于真菌代謝產(chǎn)物具有多種結(jié)構(gòu)類型和生理活性，是尋找新的天然藥物的重要來源。作為療效顯著的大型真菌類民族藥，有關(guān)阿里紅化學(xué)成分和藥理活性的研究較少，對質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控

2、制方面的研究更為鮮有。因此本研究以阿里紅為對象，在前期研究工作的基礎(chǔ)上，對其化學(xué)成分、藥理活性和質(zhì)量控制等方面進行了系統(tǒng)的研究，并對部分單體成分進行了藥理活性篩選。同時以阿里紅中分離的到的二十余個羊毛甾烷型三萜為對象進行ESI-MS/MS多級裂解規(guī)律研究。另外對阿里紅中主要化合物類型-羊毛甾烷三萜化學(xué)成分和藥理作用的研究現(xiàn)狀進行了綜述。本研究取得了一定的進展，現(xiàn)歸納總結(jié)如下。
　　 從阿里紅子實體的乙醇提取物中，利用現(xiàn)代制備色譜

3、技術(shù)和分離方法對阿里紅子實體的石油醚、氯仿、乙酸乙酯等部分進行系統(tǒng)分離，得到34個化合物。綜合應(yīng)用紅外光譜（IR）、質(zhì)譜（EIMS、ESIMS）及核磁共振光譜（譜（1HNMR、13CNMR、1H-1HCOSY、HMBC、HSQC、DEPT）等現(xiàn)代波譜學(xué)方法和X光衍射技術(shù)，并輔以化學(xué)方法鑒定了其中的32個，它們分別屬于三萜類、倍半萜類、氨基酸類、甾醇類，其中有3個為新化合物，4個為首次從該真菌中分得。
　　 新化合物分別為錐滿烷型

4、倍半萜類化合物，命名為：阿紅酸（3，7-dihydroxy-driman-11-oic acid），羊毛甾烷型三萜類化合物，命名為：阿里紅素（18，23-epoxy-9α-ethoxy-3α-carbohydroxyacetyloxy-24α-methyl-lanost-8-en-26，23-olide），氨基酸類化合物命名為：阿里紅氨酸[2-（1-carboxyhexadecylamino）-2-aminosuccinicacid]。

5、
　　 已知化合物鑒定為：fomitopsins C，albieanic acid，齒孔醇，3-酮基-去氫硫色多孔菌酸，去氫齒孔酸，齒孔酸，硫色多孔菌酸，去氫硫色多孔菌酸，去氫齒孔酮酸，變孔絢孔菌酸 D，變孔絢孔菌酸 C，阿里紅酸，fomlactone A，fomlactone B，fomlactone C，阿里紅醇A，阿里紅醇B，阿里紅酸A，阿里紅酸B，阿里紅酸C，阿里紅酸D，阿里紅酸E，阿里紅酸F，阿里紅酸G，落葉松酸，麥角

6、甾醇，麥角甾-7，22烯-3β醇，麥角甾-5，22烯-3β醇，正十二烷。
　　 在本室前期對阿里紅的化學(xué)成分初步探索基礎(chǔ)上，我們繼續(xù)分離純化工作對各單體化合物進行一定量的積累，以部分單體化合物通過乙酰膽堿酯酶模型篩選，反應(yīng)系統(tǒng)中終濃度為5μg/mL和50μg/mL的乙酰膽堿酯酶抑制活性。結(jié)果表明，盡管與陽性藥相比，活性相對較弱，但大部分化合物的活性具有濃度依賴性，抑制率隨濃度升高而增加。同時我們還以MTT法和SRB法對得到的化合

7、物進行了抗腫瘤的活性研究，對部分化合物進行了6個體外細胞模型的篩選，發(fā)現(xiàn)新化合物阿紅酸對HL-60和BGC-823在較高濃度具有一定的抑制活性，而其他化合物作用不明顯，但有一定濃度和活性的依賴性。
　　 對分離得到羊毛甾烷三萜化合物標(biāo)品進行ESI/MSn多級裂解規(guī)律研究，利用LC-ESI/MSn技術(shù)在優(yōu)化指紋圖譜條件的基礎(chǔ)上，結(jié)合得到的裂解規(guī)律對阿里紅原藥材中的化學(xué)成分進行鑒別和結(jié)構(gòu)推斷，該裂解規(guī)律可幫助羊毛甾烷型三萜的鑒別和深

8、入研究阿里紅化學(xué)成分。對不同產(chǎn)地的16批阿里紅樣品的甲醇提取物進行5個特征成分的同時定量分析，為阿里紅藥材的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。
　　 木蹄層孔菌[Fomes fomentarius（L.Ex.Fr.）]為多孔菌科（Polyporaceae）層孔菌屬（Fomes）大型真菌，又稱木蹄。多年生，多生于闊葉樹干上。廣泛分布于我國東北、西南和西部等地區(qū)。藥用有消積化瘀作用，其味微苦，性平。木蹄作為民間藥物歷史悠久，用于治療食道癌、胃癌

9、、子宮癌等。其藥用部位為子實體，現(xiàn)代藥理研究表明，木蹄粗提物具有抗腫瘤，抗氧化，增強免疫功能等活性。為了進一步闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，尋找新的有效部位及有效成分，我們對木蹄層孔菌的化學(xué)成分進行了研究，部分單體化合物進行了活性篩選。
　　 從木蹄的95％7，醇提取物中分離得到了16個化合物，鑒定了其中的14個化合物，分別為fomentarinin（Ⅰ），泡桐素（Ⅱ），原兒茶醛（Ⅲ），4-（3，4-二羥苯基）-3-丁烯-2-酮（Ⅳ），丁

10、香酸（Ⅴ），丁香醇（Ⅵ），香草醛（Ⅶ），5α，8α-過氧化麥角甾-6，22-二烯-3β醇（Ⅷ），麥角甾-7，22-二烯-3β-醇（Ⅸ），麥角甾-7，22-二烯-3，6-二酮（Ⅹ），麥角甾-7，22-二烯-3-酮（Ⅺ），麥角甾醇（Ⅻ），β-谷甾醇（ⅩⅢ），2-羥基-蠟酸乙酯（ⅩⅣ）。
　　 化合物Ⅰ為新化合物，命名為：木蹄素（ethyl tetrahydro-5-tridecylfuran-2-carboxylate）?；衔铫?

11、Ⅷ、Ⅹ、ⅩⅢ、ⅩⅣ均為首次從該種真菌中分離得到。通過體外抗腫瘤活性篩選，結(jié)果表明進行測試的化合物在濃度較高時對不同細胞株有一定抑制作用，為進一步研究木蹄中有效成分的藥理活性提供依據(jù)。
　　 綜上，本文主要系統(tǒng)地研究了層孔菌屬的兩個大型藥用真菌阿里紅和木蹄的化學(xué)成分和藥理活性，以及阿里紅的ESI-MS/MS多級裂解規(guī)律和成分定量分析等方面的研究，建立了阿里紅藥材的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，為進一步的開發(fā)和利用這兩個藥用真菌提供了物質(zhì)基礎(chǔ)和理論