2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、菝葜(SmilaxchinaL)又名金剛藤,是百合科菝葜屬的一種多年生落葉攀援灌木,藥用其根莖。目前臨床上主要用于婦科盆腔炎等疾病的治療,有較好療效。目前的菝葜制劑主要為40﹪乙醇提取物制成的糖漿、膠囊劑等,采用的仍是水煮醇沉工藝,活性成分難以得到保證,有效成分較低、服用量大,同時(shí)對(duì)有效作用部位及治療盆腔炎等疾病的相關(guān)藥理學(xué)沒有進(jìn)行過(guò)較系統(tǒng)全面的研究,影響了其在臨床上的進(jìn)一步推廣應(yīng)用。本文通過(guò)膜分離技術(shù)對(duì)菝葜原有提取工藝進(jìn)行改進(jìn),以兩種

2、黃酮和薯蕷皂苷為質(zhì)量控制指標(biāo),建立了HPLC含量測(cè)定方法,同時(shí)結(jié)合其主治病癥盆腔炎、慢性盆腔炎等疾病相關(guān)藥理學(xué)模型,如抗炎、鎮(zhèn)痛、免疫抑制、抗菌等,對(duì)其治療及機(jī)理進(jìn)行了探討,研究結(jié)果給菝葜的臨床用藥及進(jìn)一步開發(fā)利用提供了理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本文完成的主要工作如下:1.改進(jìn)了菝葜提取物制備工藝并對(duì)其中的薯蕷皂甙元、山柰酚和槲皮素進(jìn)行了HPLC定量分析通過(guò)膜分離技術(shù)對(duì)菝葜原有生產(chǎn)工藝進(jìn)行了改進(jìn),并對(duì)其有效成分進(jìn)行了測(cè)定。用純甲醇為流動(dòng)相在室溫(

3、25℃)和流速為1ml·min-1時(shí)測(cè)得薯蕷皂甙元的保留時(shí)間為12.35min左右;用水-乙腈-磷酸-三乙胺(65:35:0.27:0.45)作為流動(dòng)相,流速0.7ml·min-1和在室溫(25℃)時(shí)測(cè)得山柰酚和槲皮素的保留時(shí)間分別為24.32min和13.94min左右;且薯蕷皂甙元和山柰酚主峰與相鄰雜峰分離度均大于2,達(dá)到了色譜分離的要求,槲皮素主峰也與相鄰雜峰獲得了較好的分離效果。HPLC分析表明水提醇沉提取物、膜分離物和乙酸乙酯

4、提取物中薯蕷皂苷元、槲皮素和山柰酚含量依次為0.0183﹪,0.0299﹪和0.1446﹪;0.0102﹪,0.0164﹪和0.1836﹪;0.0076﹪,0.0093﹪和0.1232﹪。該方法精密度和重現(xiàn)性均較好。同時(shí)表明了膜分離工藝代替?zhèn)鹘y(tǒng)工藝提純金剛藤有效成分、去除雜質(zhì)是可行的。2.菝葜不同提取物的抗炎作用研究采用蛋清致足腫脹、甲醛致足腫脹、二甲苯致耳腫脹和醋酸致腹膜炎模型對(duì)菝葜不同提取物對(duì)急性、早期炎癥的抗炎作用進(jìn)行了研究,結(jié)果

5、表明:在100g·生藥/kg劑量下,各提取物能顯著降低蛋清誘導(dǎo)的大鼠足跖腫脹程度,活性大小依次為乙酸乙酯提取物>膜分離物>水提物;此外,還能明顯抑制甲醛誘導(dǎo)的小鼠足腫脹程度、小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高和二甲苯誘導(dǎo)的耳廓腫脹,活性依次為水提物>乙酸乙酯提取物>膜分離物,但三種提取物間差異并不顯著;皮下植入瓊脂致小鼠肉芽腫形成模型研究結(jié)果也表明菝葜提取物對(duì)炎癥晚期(慢性炎癥)也有一定的抑制作用,活性大小依次為乙酸乙酯提取物>膜分離物>水提物

6、。通過(guò)大鼠血小板和腹腔巨噬細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)對(duì)菝葜的抗炎機(jī)理進(jìn)行了探討,研究了菝葜不同提取物(1-100mg·ml-1)對(duì)sPLA2活性,NO、TXB2和PGE2合成/釋放的影響,各提取物能明顯抑制NO的合成、釋放及sPLA2、COX1和COX2酶活性,抑制活性大小依次為乙酸乙酯提取物、膜分離物和水提物。提示其抗炎活性機(jī)理可能是通過(guò)抑制花生四烯酸代謝的多個(gè)環(huán)節(jié)及NO的合成、釋放,大大降低炎癥部位的炎性介質(zhì)而發(fā)揮抗炎作用。各提取物對(duì)蛋清致炎及炎

7、性介質(zhì)的抑制作用隨著提取物中薯蕷皂苷元、槲皮素和山柰酚含量增大而增強(qiáng)。3.菝葜不同提取物的免疫調(diào)節(jié)作用研究用細(xì)胞免疫相關(guān)動(dòng)物模型及淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)研究了菝葜對(duì)細(xì)胞免疫和體液免疫功能的影響,各提取物(50-100g.生藥/kg)不同程度地影響小鼠脾臟和胸腺重量,顯著抑制小鼠DTH;一定程度地抑制體液免疫,其中均以膜分離物抑制效果較好;1-100mg·ml-1劑量明顯抑制大鼠B、T細(xì)胞的增殖(高劑量乙酸乙酯提取物例外);結(jié)果表明對(duì)細(xì)胞免

8、疫及體液免疫均有一定程度的抑制作用。大鼠腹腔巨噬細(xì)胞體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明菝葜各提取物能顯著增強(qiáng)其吞噬能力,其機(jī)理主要是提高LDH活性而提供更充分的能量,同時(shí)提高溶菌酶和ACP活性而增強(qiáng)其對(duì)病菌的分解破壞能力。(100mg·ml-1)高劑量作用時(shí)巨噬細(xì)胞吞噬能力及各酶活性隨提取物中薯蕷皂苷元、槲皮素和山柰酚含量增大而顯著提高。4.菝葜不同提取物的抗菌作用研究三種提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)中的各種革蘭氏陽(yáng)性菌都有較好的抑制作用,并隨著提取物中薯蕷皂苷元、

9、槲皮素和山柰酚含量增大而增強(qiáng);除了對(duì)大腸桿菌、奴卡氏菌和新生隱球菌有一定程度抗菌作用外,對(duì)實(shí)驗(yàn)中的其它各種革蘭氏陰性菌及真菌則幾乎沒有什么抑制作用。膜分離物具有比水提物更強(qiáng)的抗菌活性。微量熱法實(shí)驗(yàn)表明:在藥物作用下,大腸桿菌生長(zhǎng)停滯期延長(zhǎng),生長(zhǎng)峰明顯后移,生長(zhǎng)期的最大發(fā)熱功率顯著減小,在60μg/ml濃度以下影響較小,但隨濃度的增大,變化更趨明顯,表明不同提取物對(duì)大腸桿菌具有較明顯抗菌活性。5.菝葜不同提取物的鎮(zhèn)痛作用研究用多種動(dòng)物模型

10、及肥大細(xì)胞體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)研究了菝葜的鎮(zhèn)痛作用和可能機(jī)理,結(jié)果表明菝葜不同提取物不僅能明顯提高小鼠熱致痛痛閾;還能明顯降低腹腔注射醋酸引起小鼠產(chǎn)生扭體反應(yīng)的扭體次數(shù)及足注射甲醛引起小鼠足紅腫疼痛所致的舔足或抬足次數(shù),對(duì)小鼠不同部位的熱及化學(xué)物質(zhì)致痛均具有較明顯的鎮(zhèn)痛作用,并表現(xiàn)出一定的劑量依賴效應(yīng)。三種提取物間差異并不顯著。各提取物10μg·ml-1以上劑量不僅能極顯著抑制肥大細(xì)胞組胺的合成/釋放,還能明顯抑制肥大細(xì)胞的合成/釋放。高劑量(

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