雞滑液囊支原體JS1株的分離鑒定及禽支原體、大腸桿菌、沙門菌多重PCR檢測(cè)方法的建立.pdf

1、雞滑液囊支原體感染是由滑液支原體（Mycoplasma synoviae，MS）引起的，雞和火雞的一種急慢性傳染病，其臨床以病雞關(guān)節(jié)或足墊腫大、滑液囊和腱鞘發(fā)炎為主要特征，也可引起呼吸道疾病及氣囊炎，嚴(yán)重的引起全身性感染，也可導(dǎo)致新城疫病毒、傳染性支氣管炎病毒、大腸桿菌等病原微生物的混合或繼發(fā)感染。該病在世界范圍內(nèi)流行，多個(gè)國(guó)家的流行病學(xué)監(jiān)測(cè)表明MS在商品代雞群中有很高的流行率。近幾年滑液支原體在中國(guó)的發(fā)病率有增多趨勢(shì)，很多地區(qū)季節(jié)性發(fā)

2、病相當(dāng)嚴(yán)重。MS感染雞群可導(dǎo)致跛行、產(chǎn)蛋量下降、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩及酮體降級(jí)等危害，嚴(yán)重影響雞的生產(chǎn)性能，給世界商品養(yǎng)雞產(chǎn)業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　本研究從江蘇某雞場(chǎng)收集病雞，對(duì)其進(jìn)行支原體分離，獲得一株疑似支原體的分離物，通過(guò)菌落觀察、血清學(xué)實(shí)驗(yàn)、支原體16S rRNA通用引物測(cè)序鑒定及與實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)株MS WVU1853差異性鑒定，確定該分離物為滑液支原體，且不同于本實(shí)驗(yàn)室的MS標(biāo)準(zhǔn)株(MS WVU1853)，因此將其命名為JS1株

3、。
　　本研究對(duì)滑液支原體SPF雞攻毒模型進(jìn)行了初步探索，將分離株MS JS1對(duì)21日齡SPF雞進(jìn)行攻毒，分別采用關(guān)節(jié)注射、肌肉注射、足墊注射和滴鼻四組不同攻毒方式，每組10只SPF雞，攻毒劑量為每只1×109 CCU。結(jié)果表明攻毒方式不同，其發(fā)病率也不一致，其中關(guān)節(jié)攻毒組發(fā)病率最高，達(dá)9/10，其后依次是足墊攻毒組發(fā)病率為8/10，滴鼻攻毒組發(fā)病率為4/10，肌肉攻毒組發(fā)病率為0。除肌肉攻毒組無(wú)發(fā)病癥狀外，其余三種攻毒方式均能引

4、起不同程度的特征性病變，即雞關(guān)節(jié)囊腫、足墊腫大、胸部皮下囊腫、跛足以及雞冠蒼白等，對(duì)發(fā)病雞部分剖檢也能從關(guān)節(jié)、足墊或肺組織中分離到滑液支原體。
　　針對(duì)滑液支原體（Mycoplasma synoviae,MS）的pdhA基因，雞毒支原體（Mycopl asma gallisepticum，MG）的gapA基因，大腸桿菌（Escherichia coli,EC）的phoA基因，沙門菌（Salmonella,SA）的invA基因分別設(shè)

5、計(jì)2-3對(duì)特異性引物，通過(guò)篩選引物組合、優(yōu)化體系條件，最后確定了一組最優(yōu)引物組合和反應(yīng)體系，建立了針對(duì)這四種禽常見(jiàn)致病菌的多重PCR檢測(cè)方法。特異性實(shí)驗(yàn)證明該方法能特異性擴(kuò)增出MS、MG、EC和SA的目的片段，其他非相關(guān)的禽致病菌則無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物。敏感性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MS和MG的檢測(cè)靈敏度均達(dá)到1×102CCU/反應(yīng)，EC的檢測(cè)靈敏度1×102CFU/反應(yīng)，SA的檢測(cè)靈敏度1×103CFU/反應(yīng)。臨床感染組織樣本檢測(cè)結(jié)果顯示，多重PCR檢測(cè)結(jié)果與