高脂飼養(yǎng)胰島素抵抗大鼠胰島內(nèi)胰高血糖素和GLP-1變化的研究——胰島α細(xì)胞胰島素抵抗再探查.pdf

1、第一部分胰島素抵抗大鼠胰高血糖素分泌的變化 目的 明確系統(tǒng)性胰島素抵抗時(shí)胰島內(nèi)胰高血糖素基因轉(zhuǎn)錄、翻譯和激素釋放各個(gè)環(huán)節(jié)的變化。 方法 雄性Wistar大鼠分別予以普通飼料和高脂肪飼料喂養(yǎng)8周，抽血檢測血漿胰高血糖素水平，取胰島裂解后檢測裂解液中胰高血糖素水平，提取胰島mRNA用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測胰島內(nèi)胰高血糖素mRNA水平。 結(jié)果 1．胰島素抵抗大鼠血胰高血糖素水平明顯升高，約

2、為正常大鼠1.3—1.44倍，胰島內(nèi)胰高血糖素蛋白水平和mRNA水平明顯升高，分別為正常大鼠的1.3和1.35倍。 2．胰島素抵抗大鼠的胰島內(nèi)I／G比值明顯高于正常大鼠，但是糖尿病的胰島素抵抗大鼠胰島內(nèi)I／G比值比正常大鼠還低。 結(jié)論 1．與NC大鼠比較，IR大鼠胰島內(nèi)胰島素和胰高血糖素蛋白水平均升高，即胰島內(nèi)胰高血糖素產(chǎn)生不受高胰島素的抑制，強(qiáng)烈提示α細(xì)胞的胰島素抵抗，這與我們過去的研究結(jié)果一致。 2．

3、與NC大鼠比較，IR大鼠胰島內(nèi)胰高血糖素mRNA水平和蛋白水平，以及血胰高血糖素水平升高幅度基本一致，說明α細(xì)胞的胰島素抵抗主要影響胰高血糖素基因轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致胰高血糖素的蛋白合成與釋放相應(yīng)改變。 3．IR大鼠的胰島內(nèi)I／G比值明顯升高，提示胰島素抵抗階段α和β細(xì)胞均出現(xiàn)代償性的高分泌，但是β細(xì)胞改變更明顯；糖尿病大鼠胰島內(nèi)I／G比值明顯降低，到糖尿病階段β細(xì)胞分泌胰島素功能已經(jīng)衰竭，提示β細(xì)胞代償性高分泌早于Q細(xì)胞，或是雖然β細(xì)胞

4、代償性高分泌不比α細(xì)胞發(fā)生早，但是進(jìn)展比α細(xì)胞快。 目的 明確高血糖對(duì)胰島α細(xì)胞分泌胰高血糖素的影響。 方法 胰島分為3組，分別予以葡萄糖濃度為2.2，16.7和25mmol/L的RPMI-1640培養(yǎng)基孵育1，2和4天，收集培養(yǎng)液以檢測胰高血糖素水平、同時(shí)收集胰島裂解后檢測裂解液內(nèi)胰高血糖素水平。 結(jié)果 1．NC和IR胰島暴露于不同濃度葡萄糖，均表現(xiàn)為高糖抑制胰高血糖素分泌、低糖刺激胰高

5、血糖素分泌，但是予以高糖(25mM)刺激4天后抑制胰高血糖素分泌的作用減弱、尚無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2．與NC胰島比較，IR胰島暴露于高糖分泌胰高血糖素明顯升高。 3．與NC胰島比較，低糖刺激IR胰島分泌胰高血糖素減少、尚無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 1．暴露于高糖(25mM)較長時(shí)間，抑制胰島分泌胰高血糖素的作用有所減弱，表現(xiàn)為胰高血糖素逐漸升高的趨勢(shì)，慢性高糖最終是否會(huì)升高胰高血糖素水平有待延長暴露時(shí)間進(jìn)一步研究。

6、 2．與NC胰島比較，高糖抑制IR胰島分泌胰高血糖素作用明顯減弱，說明α細(xì)胞的胰島素抵抗會(huì)加重高血糖。 3．與NC胰島比較，低糖刺激IR胰島分泌胰高血糖素輕微減少、尚無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，顯示降低的趨勢(shì)，提示長期IR可能會(huì)削弱低糖刺激胰島α細(xì)胞分泌的反應(yīng)。 目的 觀察不同濃度棕櫚酸對(duì)胰高血糖素分泌的影響，并觀察了胰島素抵抗對(duì)其影響。 方法 胰島分為5組，一組予以1mmol/L棕櫚酸孵育3小時(shí)，另外

7、4組分別予以棕櫚酸濃度為0，0.25，0.5和1mmol/L，的DMEM培養(yǎng)基孵育1，2和4天，收集培養(yǎng)液以檢測胰高血糖素水平、同時(shí)收集胰島裂解后檢測裂解液中胰高血糖素水平。 結(jié)果 1．NC胰島暴露于1mmol/L棕櫚酸4天，釋放胰高血糖素明顯增加，同時(shí)胰島內(nèi)胰高血糖素?zé)o明顯減少。 2．與正常胰島比較，IR胰島暴露于不同濃度棕櫚酸孵育較長時(shí)間(≥1天)釋放胰高血糖素明顯增加，同時(shí)胰島內(nèi)胰高血糖素含量無明顯減少。

8、 3．與正常胰島比較，暴露于不同濃度棕櫚酸4天，IR胰島內(nèi)胰高血糖素含量均有所降低、但是尚無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 1．長時(shí)間、高濃度棕櫚酸促進(jìn)NC胰島釋放胰高血糖素，同時(shí)胰島內(nèi)胰高血糖素含量無明顯減少，說明胰高血糖素合成也相應(yīng)增加。 2．與正常胰島比較，暴露于棕櫚酸較長時(shí)間增加IR胰島釋放胰高血糖素；同時(shí)胰島內(nèi)胰高血糖素含量無明顯減少，說明R胰島胰高血糖素合成也相應(yīng)增加。 3．與正常胰島比較，短時(shí)間暴

9、露于不同濃度棕櫚酸，IR胰島內(nèi)胰高血糖素含量升高或無明顯差異，但是長時(shí)間暴露于不同濃度棕櫚酸IR胰島內(nèi)胰高血糖素含量輕微減少、尚無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示有可能暴露于棕櫚酸更長時(shí)間、就會(huì)出現(xiàn)胰島內(nèi)胰高血糖素含量減少，有待延長觀察時(shí)間進(jìn)一步研究。 第四部分胰島素抵抗大鼠胰島內(nèi)胰高血糖素樣肽—1(GLP-I)的變化 目的 觀察胰島素抵抗大鼠胰島α細(xì)胞內(nèi)GLP-1含量的變化。 方法 雄性Wistar大鼠分別予以