BMP-2對(duì)肺癌A549細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制因子表達(dá)的影響.pdf

1、第一章肺癌A549細(xì)胞骨形成蛋白-2及骨形成蛋白受體的表達(dá) 目的：觀察肺癌A549細(xì)胞骨形成蛋白-2(BMP-2)及骨形成蛋白受體(BMPR)的表達(dá)。 方法：采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè),JJBMP-2、BMPR-IA、BMPR-IB和BMPR-II基因的表達(dá)。采用Western blot檢測(cè)BMP-2、BMPR-IA、BMPR-IB和BMPR-II蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：(1)RT-PCR表明肺癌A

2、549細(xì)胞表達(dá)BMP-2、BMPR-IA、BMPR-IB和BMPR-II基因。(2)Western blot檢測(cè)到肺癌A549細(xì)胞中BMP-2、BMPR-IA、BMPR-IB和BMPR-II蛋白的表達(dá)。 結(jié)論：肺癌A549細(xì)胞表達(dá)BMP-2、BMPR-IA、BMPR-IB和BMPR-II。 第二章骨形成蛋白-2對(duì)人肺癌A549細(xì)胞株基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制因子的影響 目的：觀察肺癌A549細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP

3、s)及基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子(TIMPs)表達(dá)的類型以及BMP-2對(duì)A549細(xì)胞合成和分泌MMPs與TIMPs的影響。 方法：采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)肺癌A549細(xì)胞MMPs和TIMPs的表達(dá)。采用ELISA和western blot檢測(cè)A549細(xì)胞培養(yǎng)液中MMPs和TIMPs蛋白質(zhì)水平。 結(jié)果：人肺癌A549細(xì)胞株可表達(dá)MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MMP-10、M

4、MP-12、MMP-14、TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3 mRNA。首次發(fā)現(xiàn)BMP-2呈劑量和時(shí)間依賴性促進(jìn)人肺癌A549細(xì)胞株MMP-2和MMP-9的分泌；BMP-2還可促進(jìn)A549細(xì)胞株合成的MMP-2和MMP-9的激活。BMP-2對(duì)人肺癌A549細(xì)胞株TIMP-1和TIMP-2分泌無(wú)影響。 結(jié)論：肺癌A549細(xì)胞可表達(dá)多種MMPs和TIMPs，可以作為具有肺癌細(xì)胞表型特征的細(xì)胞模型來(lái)研究MMPs和TIMPs的表達(dá)

5、與調(diào)控。BMP-2可上調(diào)肺癌細(xì)胞MMP-2及MMP-9的分泌和激活，此可能為BMP-2促肺癌轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制。 第三章骨形成蛋白-2促人肺癌A549細(xì)胞株基質(zhì)金屬蛋白酶合成分泌的機(jī)制研究 目的：探討B(tài)MP-2促人肺癌細(xì)胞MMPs的作用機(jī)制，旨在探索BMP-2促肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制及找到新的肺癌防治途徑。 方法：Western blot檢測(cè)體外培養(yǎng)A549細(xì)胞BMPR-Ⅱ的表達(dá)。采用ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中MMP-2

6、和MMP-9蛋白質(zhì)水平。采用Western Blot檢測(cè)p-JNK，JNK，p-p38，p38，p-ERKl/2，ERKl/2，p-Akt，Akt和p-Smadl。用小分子干擾RNA(siRNAs)抑制BMPR-Ⅱ表達(dá)，聯(lián)合BMPs拮抗劑noggin，MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)阻斷劑U0126，SB203580和SP600125，PI-3激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)阻斷劑LY294002干預(yù)，以觀察BMP-2促肺癌細(xì)胞MMP-2和MMP-9分泌作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制

7、。 結(jié)果：①Noggin明顯抑制重組人BMP-2蛋白對(duì)A549細(xì)胞MMP-2和MMP-9的促分泌作用；②siRNAs轉(zhuǎn)染下調(diào)A549細(xì)胞BMPR-Ⅱ表達(dá)后可抑制BMP-2對(duì)該細(xì)胞MMP-2、MMP-9的促分泌作用；③BMP-2可誘導(dǎo)A549細(xì)胞Smadl、p38、ERK和Akt磷酸化，siRNAs轉(zhuǎn)染阻斷BMPⅡ型受體表達(dá)可抑制這些效應(yīng)；④ERK抑制劑U0126和PI-3激酶抑制劑LY294002可抑制BMP-2促A549細(xì)胞M

8、MP-2分泌的作用，而U0126和p38抑制劑SB203580可減弱BMP-2對(duì)A549細(xì)胞MMP-9的促分泌作用。 結(jié)論：BMPs的天然抑制劑noggin可顯著減弱BMP-2對(duì)人肺癌A549細(xì)胞MMP-2和MMP-9的促分泌作用。BMP-2通過(guò)BMPR／PI-3激酶和BMPR／ERI信號(hào)通路促進(jìn)A549細(xì)胞MMP-2分泌，而通過(guò)BMPR／p38和BMPR／ERK信號(hào)通路促進(jìn)A549細(xì)胞MMP-9分泌。另外，Smadl的激活也可

9、能參與了BMP-2對(duì)MMPs的調(diào)節(jié)。 第四章骨形成蛋白-2對(duì)肺癌A549細(xì)胞膜型基質(zhì)金屬蛋白酶-1表達(dá)的影響 目的：MT-MMP以直接和／或間接的方式參與對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的降解。本研究首次探討骨形成蛋白-2(BMP-2)對(duì)人肺癌A54：9細(xì)胞膜型基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MTl-MMP)表達(dá)的影響。 方法：Western雜交檢測(cè)MTl-MMP蛋白質(zhì)表達(dá)。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中活性M