STAT1和Survivin及相關蛋白在胃癌中相關性的研究及其臨床意義.pdf

1、目的：胃癌是我國的常見惡性腫瘤之一。胃癌存在細胞凋亡明顯受阻現(xiàn)象。Survivin是IAP家族的成員，具有較強抑制凋亡功能。Survivin在胎兒組織中大量表達，然而在正常的分化成熟的組織中無表達。Survivin同時也在大量惡性腫瘤組織中過度表達。 淋巴結轉移是胃癌預后中重要指標，而胃癌手術標本的淋巴結檢查數(shù)量不足將影響淋巴結檢查結果的準確性。AJCC/UICC推薦胃癌淋巴結檢查數(shù)應≥15枚。 本研究并首次提出STAT

2、1和Survivin存在相關性的推測，擬通過通過組織芯片和免疫組織化學的方法，首次在有完整淋巴結檢查數(shù)據(jù)和有完整臨床病理學檢查資料的胃腺癌組織中，觀察STAT1和Survivin及其相關蛋白在人胃腺癌組織中表達的情況，研究STAT1和Survivin及其相關蛋白表達與人胃腺癌臨床病理學指標之間的關系以及各蛋白表達之間的相關性，探討STAT1和Survivin的臨床意義，兩者在胃腺癌凋亡調控中可能存在的路徑以及兩者的相關性。 在人

3、胃腺癌組織中初步探討了STAT1和Survivin的相關性后，選用人胃癌細胞株SGC7901，分別和/或同時使用IFN-γ、不同濃度的STAT1反義寡核苷酸和不同濃度的Survivin反義寡核苷酸處理細胞，通過免疫細胞化學的方法和圖像分析的方法觀察在STAT1和Survivin表達水平改變的情況下，兩者及其相關蛋白的表達變化；同時進行Hoechest33258染色觀察細胞凋亡的變化。 方法：收集1989～2001年江漢大學附屬醫(yī)

4、院行胃腺癌手術標本140例進行臨床病理學研究，選用胃癌細胞系SGC7901進行細胞生物學研究。胃腺癌手術標本經(jīng)過溶脂法檢查獲取全數(shù)淋巴結，行4um間斷連續(xù)切片、常規(guī)HE染色和CK18+EMA免疫組化染色以獲取完整的淋巴結檢查資料，同時收集完整的病理學檢查資料。通過電話形式隨訪，所有隨訪者至少接受一次胃鏡檢查進行臨床復查。建立胃癌組織芯片，經(jīng)免疫組織化學染色方法檢查胃癌原發(fā)灶中STAT1、Survivin、caspase3、caspase

5、7、p53和PTEN等蛋白表達的情況。全部數(shù)據(jù)均經(jīng)SAS8.1統(tǒng)計學軟件進行分析處理，各分子指標之間以及與臨床病理學指標之間的相關性通過卡方檢驗、spearman等級相關及精確概率法分析；生存曲線通過life-table法進行繪制，各分子指標和病理學指標與生存之間的關系通過Cox模型回歸分析。 在SGC7901胃癌細胞中，分別和/或同時使用IFN-γ、不同濃度的STAT1反義寡核苷酸和不同濃度的Survivin反義寡核苷酸處理細

6、胞，通過免疫細胞化學染色和平均光密度分析，觀察STAT1、Survivin以及相關凋亡調節(jié)因子caspase7和p21WAF在蛋白水平的表達變化。通過Hoechest33258染色，在高倍鏡下觀察細胞亮度及形態(tài)學變化以檢測凋亡，并隨機數(shù)取1000個細胞進行凋亡細胞記數(shù)。數(shù)據(jù)均經(jīng)SAS8.1統(tǒng)計學軟件進行分析處理，平均光密度值之間的差異通過t檢驗分析。 結果： 1.140例胃腺癌制成288點組織芯片一枚。經(jīng)免疫組織化學染色

7、及結果判讀，組織芯片平均利用率為83.3％。 各分子指標之間關系如下： Survivin和STAT1(χ2=4.11，P=0.043)、caspase3(χ2=5.76，P=0.02)負相關，與PTEN(χ2=4.17，P=0.04)正相關； STAT1和caspase3(χ2=13.33，P＜0.001)、caspase7(χ2=5.84，P=0.016)正相關；caspase3和caspase7正相關(χ2=

8、23.98，P＜0.001)；p53和PTEN正相關(P=0.048)。 2.140例胃腺癌中，男性99例，女性41例(構成比分別是71％和29％)。年齡26～72歲，中位年齡58歲。腫塊大小0.8～15cm，中位大小5.4cm。浸潤深度按照UICC分期，T1：16例，T2：22例，T3：45例，T4：57例。高分化型腺癌52例，低分化型腺癌88例。有異質性胃腺癌84例，無異質性胃腺癌56例。共獲取淋巴結共8892枚，63.5枚

9、/例(17～157枚，中位數(shù)：61枚，95％CI：59-68)。其中102例存在淋巴結轉移，共檢出轉移淋巴結1824枚(1824/8892，20.5％)。按照AJCC/UICC淋巴結分期標準，N0期38例，N1期34例，N2期30例，N3期38例。 各分子指標與病理學指標關系如下： UICC淋巴結分期：Survivin表達陽性率與UICC淋巴結分期負相關(P=0.04)。其他分子指標與UICC淋巴結分期無關。 浸

10、潤深度：STAT1表達陽性率(r=-0.21，P=0.03)與浸潤深度負相關；PTEN表達陽性率(P=0.02)與浸潤深度正相關。其他分子指標與浸潤深度無關。組織學分型：Survivin在高分化型腺癌中表達陽性率高于低分化型腺癌中表達陽性率，有顯著性差異(χ2=4.83，P=0.03)。STAT1在高分化型腺癌中表達陽性率低于低分化型腺癌中表達陽性率，有顯著性差異(χ2=10.2，P=0.0001)。p53在高分化型腺癌中表達陽性率低于

11、低分化型腺癌中表達陽性率(χ2=7.21，P=0.007)。PTEN在高分化型腺癌中表達陽性率高于低分化型腺癌中表日性率(χ2=5.47，P0.02)。其他分子指標與組織學分型無關。 異質性：caspase3在有異質性胃癌中表達陽性率高于無異質性胃癌中表達陽性率，有顯著性差異(χ2=7.36，P=0.007)。其他分子指標與異質性無關。年齡：p53在＜60歲年齡組表達陽性率低于≥60歲年齡組表達陽性率，有顯著性差異(χ2=7.2

12、0，P=0.007)。PTEN在＜60歲年齡組中表達陽性率低于≥60歲年齡組中表達陽性率(χ2=4.37，P=0.04)。其他分子指標與年齡無關。性別：各分子指標與性別均無關。 3.通過電話及臨床復查形式隨訪病例共110例，隨訪時間截至于2005年7月，所有隨訪者至少接受過一次胃鏡檢查。胃癌浸潤深度(χ2=7.26，P=0.007)以及UICC淋巴結分期(χ2=4.01，P=0.045)與生存時間有關。其他分子指標和病理學指標與

13、生存無關。 4.在IFN-γ刺激SGC7901胃癌細胞時，STAT1、caspase7和p2IWAF表達水平明顯上調(P＜0.05)；Survivin表達水平明顯下調(P＜0.05)。在IFN-γ刺激SGC7901胃癌細胞的同時，使用不同濃度的STAT1反義寡核苷酸抑制STAT1的表達，STAT1、caspase7和p21WAF表達水平出現(xiàn)不同程度的下調(均P＜0.05)；Survivin表達水平出現(xiàn)不同程度的上調(P＜0.05

14、)。 5.在使用不同濃度的Survivin反義寡核苷酸抑制Survivin的表達時，Survivin表達量出現(xiàn)不同程度的降低(P＜0.05)；STAT1表達水平出現(xiàn)上調(P＜0.05)；caspase7和p21WAF表達水平無明顯變化(P＞0.05)。6.胃癌SGC7901細胞株在各處理組中，凋亡無明顯變化(P＞0.05)。 結論： 1、胃腺癌組織中，STAT1表達與caspase3、7表達正相關。Survivi

15、n表達與caspase3表達正相關。STAT1表達與Survivin表達負相關。提示胃腺癌組織中STAT1和Survivin均可通過caspase3等凋亡調節(jié)點發(fā)揮其生物學作用，而STAT1和Survivin之間存在相關性。 2、STAT1和Survivin在胃癌發(fā)展的過程中發(fā)揮重要作用。STAT1蛋白表達是推測進展期胃癌的分子標志物。Survivin蛋白表達是推測胃癌淋巴結轉移及轉移程度的分子標志物。 3、Surviv

16、in表達陽性率與UICC淋巴結分期負相關，在高分化型腺癌中表達陽性率高；STAT1表達陽性率與浸潤深度負相關，在高分化型腺癌中表達陽性率低。在不同惡性程度的胃癌組織中，凋亡調節(jié)蛋白STAT1和Survivin表達水平的變化，提示胃癌惡性程度越高，其凋亡水平可能越高。 4、胃腺癌中，按照淋巴結轉移數(shù)目進行的分期和浸潤深度是重要的預后指標。 5、胃癌細胞系SGC7901中，STAT1的上調可促進caspase7和p21WAF

17、表達的上調。進一步證實胃癌細胞中STAT1可通過對caspase7和p21WAF表達的調控發(fā)揮其生物學作用。Survivin表達量的改變未引起caspase7和p21WAF表達量的變化。提示Survivin并不能通過對caspase7和p2IWAF的轉錄調節(jié)發(fā)揮其生物學作用，該結果與文獻報告Survivin通過與caspase7和p2iWAF結合而發(fā)揮抑制凋亡作用的機制一致。 6、在分別改變胃癌細胞系SGC7901中STAT1和