超分子納米粒作為抗腫瘤藥物和基因協(xié)同給藥體系的研究.pdf

1、目的:合成一種基于環(huán)糊精/金剛烷的超分子納米材料,能協(xié)同運(yùn)載小分子抗腫瘤藥物和治療基因,考察其藥物釋放特點(diǎn)與轉(zhuǎn)染效果,評(píng)價(jià)其體內(nèi)外對(duì)腫瘤細(xì)胞生長的抑制作用以及抗腫瘤效果。方法:1-金剛烷甲酸(Ad-COOH)與阿霉素(Dox)通過N,N’-羰基二咪唑(CDI)偶合后,與環(huán)糊精-聚乙烯亞胺(PEI-CD)進(jìn)行自組裝主客體反應(yīng)生成PEI-CD/Ad-Dox超分子納米聚合物,對(duì)其進(jìn)行化學(xué)、物理學(xué)及生物學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行表征。壓縮并結(jié)合腫瘤壞死因子相關(guān)

2、的凋亡誘導(dǎo)配體的基因質(zhì)粒(pTRAIL),形成超分子納米粒后,通過腫瘤細(xì)胞對(duì)超分子納米粒的攝取、TRAIL蛋白的表達(dá)、對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡影響以及毒性等各方面的考察,來確定超分子納米粒在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制效果。以人卵巢癌細(xì)胞SKOV-3荷瘤裸鼠為動(dòng)物模型,利用超分子納米粒瘤內(nèi)注射治療后,觀察小鼠腫瘤的生長情況以及生存期,以確定超分子納米粒在體內(nèi)治療時(shí)的抗腫瘤療效。結(jié)果:核磁共振氫譜、NOESY頻譜、紫外-可見光譜、熱重分析等理化表征確定了阿

3、霉素成功結(jié)合金剛烷基并通過主客體連接與PEI-CD組成超分子復(fù)合物PEI-CD/Ad-Dox;凝膠電泳阻滯實(shí)驗(yàn)證實(shí)PEI-CD/Ad-Dox在N/P比小于3時(shí)即能完全壓縮并結(jié)合質(zhì)粒DNA;透射電鏡和掃描電鏡下所示超分子納米粒是呈一定分散性的球形顆粒,在水、生理鹽水和RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)基等不同介質(zhì)中具有適宜的粒徑和Zeta電位,可用于基因轉(zhuǎn)染;體外藥物釋放實(shí)驗(yàn)說明游離藥物從超分子納米粒中先是以一級(jí)動(dòng)力學(xué)過程釋放,然后逐漸改成零級(jí)釋放

4、,釋放過程與pH有關(guān),且具有緩釋作用;細(xì)胞對(duì)超分子納米粒的攝取、表達(dá)實(shí)驗(yàn)以及Western blot蛋白印跡實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明了藥物與基因的協(xié)同入胞傳遞和基因表達(dá)過程;MTT細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)證明了超分子納米粒攜帶pTRAIL質(zhì)?？捎行У匾种迫寺殉舶┘?xì)胞SKOV-3的增長,顯示出較強(qiáng)的細(xì)胞毒性;通過流式細(xì)胞儀測得SKOV-3細(xì)胞經(jīng)超分子納米粒作用后,細(xì)胞周期被阻滯在G0/G1期,凋亡程度增加;TUNEL染色進(jìn)一步顯示了凋亡細(xì)胞的增多。瘤內(nèi)注射超分