組織工程化生物活性骨膜凍存后生物學(xué)特性的研究.pdf

1、目的:觀察凍存復(fù)蘇后組織工程化生物活性骨膜的生物學(xué)特性和成骨活性。
　　 方法:從新西蘭大白兔骨髓中分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),經(jīng)體外成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后與豬小腸粘膜下層(SIS)構(gòu)建組織工程化生物活性骨膜,另外將未誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和豬小腸粘膜下層也構(gòu)建組織工程化骨膜,而后用含10％二甲基亞砜、50％胎牛血清、40％DMEM凍存液,采用程序性降溫法將兩種工程化骨膜保存在-196℃液氮中。30天后復(fù)蘇培養(yǎng),用MTT法檢測種

2、子細(xì)胞在支架材料上的生長情況,并用掃描電鏡觀察種子細(xì)胞的生長狀態(tài),通過免疫印跡的方法來檢測復(fù)蘇后組織工程骨膜分泌Ⅰ型膠原和骨鈣素量的變化,酶組織化學(xué)法檢測堿性磷酸酶(ALP)分泌的量。
　　 結(jié)果:凍存復(fù)蘇后BMSOs仍能在SIS上保持良好的生長狀況,構(gòu)建的兩種組織工程化生物活性骨膜復(fù)蘇后在含有成骨誘導(dǎo)劑的培養(yǎng)基中培養(yǎng)可分泌一定量的Ⅰ型膠原、骨鈣素和堿性磷酸酶。而且,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)為成骨細(xì)胞與小腸粘膜下層構(gòu)成的工程化骨膜(