硼對雛鴕鳥下丘腦-垂體-卵巢軸的作用機理研究.pdf

1、非洲鴕鳥主要生活在非洲和酷熱的阿拉伯沙漠地帶。雌鴕鳥一般在2-2.5y時才達性成熟，是禽類中性成熟最晚的動物，其育雛期也很長，為3mon。究竟是什么原因使得鴕鳥性成熟這么晚?其性腺必然有其獨特的性狀。服用雌激素可使血清17β-雌二醇、血清銅藍蛋白和甘油三酯水平明顯升高，補硼后，這些升高更為明顯；說明硼有雌激素樣作用，并能增強雌激素的功能。因此，能否通過添加硼而提高鴕鳥的的養(yǎng)殖效益具有重要的科學意義。鑒于此，本研究以非洲雛鴕鳥為試驗動物，

2、分別添加硼酸Omg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L，利用透射電鏡技術、放射免疫測定、組織化學法、免疫組化定位表達及原位缺口末端標記，免疫印跡等多種方法，從細胞、亞細胞、血清激素水平、蛋白分析等多個層面系統(tǒng)地研究雌性雛鴕鳥下丘腦.垂體.卵巢軸(HPO)的組織結構特點，以及添加硼酸后對HPO軸的作用機理。 主要研究結果如下： 1.硼對雌性雛鴕鳥下丘腦的影響本試驗以45d雌性雛鴕鳥為試驗動物添加硼酸，石蠟切

3、片，HE染色、免疫印跡、免疫組化SABC法對MT1在雛鴕鳥下丘腦內分布進行定位，研究硼對雛鴕鳥下丘腦的影響及作用。結果顯示，下丘腦室旁核細胞單位面積數(shù)目在400mg/L組最高，差異不顯著。大、中型細胞率在200mg/L組最高，顯著高于其它3組；下丘腦視上核各組細胞單位面積數(shù)目在200mg/L組最高，與對照組相比差異非常顯著。大、中型細胞率在200mg/L組最高，400mg/L組主要以小型細胞居多；下丘腦弓狀核細胞單位面積數(shù)目在對照組最高

4、，200mg/L組次之，差異顯著；400mg/L組最少，差異極顯著，與對照組相比差異極顯著。對照組以小型細胞居多。室旁核褪黑素受體免疫陽性細胞(MT1ir)細胞在陽性強度表達方面，200mg/L組陽性表達最強，差異極顯著，400mg/L，組MT1ir強度表達最弱，差異極顯著；視上核MT1ir數(shù)量以400mg/L組最多，排列密集，但是平均積分光度最低，細胞形態(tài)不完整，差異極顯著；弓狀核對照組MT1ir細胞數(shù)量最多，排列密集。100mg/L

5、組平均積分光度最高，陽性表達最強，差異不顯著。400mg/L組平均積分光度最低，差異顯著。結果表明室旁核、視上核在200mg/L組具有顯著促進作用，但是400mg/L具有顯著抑制作用；弓狀核在100mg/L組時具有較小的促進作用，400mg/L組具有顯著的抑制作用。 2.硼對雌性雛鴕鳥垂體的影響采用Peacse垂體染色、免疫印跡法、免疫組化SABC法對添加硼后雛鴕鳥腺垂體3種細胞及MT1在下丘腦內分布進行定位。Peacse法結果

6、顯示對照組內嗜酸性細胞數(shù)量較多，細胞輪廓清晰，呈三角形或圓形。嗜堿性細胞大小不等，胞質內含有嗜堿性顆粒。嫌色細胞數(shù)量多，細胞體積小著色淡，細胞界限不清。添加硼100mg/L組嗜堿性細胞數(shù)量增多。200mg/L組嗜堿性細胞數(shù)量最多。400mg/L組嗜酸性、嗜堿性細胞成團分布，嫌色細胞數(shù)量最少；SABC法結果顯示對照組腺垂體中的MT1ir細胞呈深淺不等的棕黃色，胞體呈不規(guī)則形，成堆或分散分布，陽性免疫反應顆粒主要分布在細胞核上，胞質不著色。

7、100mg/L組腺垂體中的MT1ir細胞數(shù)目增多，免疫陽性細胞較強。200mg/L組腺垂體中的MT1ir細胞數(shù)目增多，免疫陽性細胞以強陽性為主。400mg/L組腺垂體中的MT1ir陽性細胞數(shù)目減少，免疫陽性細胞以弱陽性為主。結果表明：添加硼100mg/L、200mg/L組都能增加嗜堿性細胞的數(shù)目；添加100mg/L、200mg/L硼后MT1ir細胞數(shù)目呈遞增趨勢，強度也增強，但是400mg/L組對MT1ir陽性細胞產生了抑制作用。

8、 3.硼對雛鴕鳥卵巢的影響制作光鏡和電鏡樣本，提取總蛋白，采用HE、免疫組化SABC、免疫印跡法，研究雌性雛鴕鳥卵巢的組織學結構特點以及添加硼酸對雛鴕鳥卵巢的作用。結果表明，添加添加100mg/L硼能夠增大卵巢的初級卵母細胞直徑，差異非常顯著，100mg/L硼能夠顯著增加原始卵泡的數(shù)目，200mg/L能夠顯著增加原始卵泡、初級卵泡、次級卵泡數(shù)目，并且各級卵泡的卵泡細胞以及卵母細胞MT1ir細胞強度比對照組顯著增強，400mg/L能夠顯

9、著減少原始卵泡數(shù)目。 4.添加硼后血清中E2、P4的變化采用放射免疫技術，在添加硼15d，30d，45d后檢測雛鴕鳥血清中E2、P4的變化。結果顯示添加硼15d后，100mg/L、200mg/L組與對照組相比血清中E2、P4水平都升高，差異不顯著。400mg/L組的E2水平降低，差異極顯著，P4差異不顯著；添加硼30d后，100mg/L、200mg/L以及400mg/L組與對照組相比血清中E2、P4水平差異都不顯著。添加硼45d

10、后，100mg/L、200mg/L組血清中E2水平與對照組相比升高，200mg/L組差異極顯著，400mg/L組的水平降低，差異不顯著。200mg/L、400mg/L組的P4水平與對照組相比降低，差異顯著。結果表明，適量添加硼能夠增加血清中E2水平，但是在添加量達到400mg/L的時候會降低血清中E2水平；添加硼15-30d時對P4的影響較小，但是添加到45d時血清內P4水平顯著降低。 5.硼對雌性雛鴕鳥下丘腦-垂體-卵巢軸細胞