補腎調(diào)經(jīng)方對雄激素致無排卵模型大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸及子宮的影響.pdf

1、本文研究補腎調(diào)經(jīng)方對睪酮所致無排卵模型(androgenstERilizedrats，ASR)大鼠性腺軸及子宮的影響，以探討其作用環(huán)節(jié)及作用機理，為補腎調(diào)經(jīng)方治療無排卵疾病的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法： 1無排卵大鼠模型制備、分組、給藥及處死 取同日出生的9日齡SD雌性幼年大鼠60只，隨機分為4組，一組頸背部皮下注射醫(yī)用花生油0.05ml，為正常對照組，另3組分別在頸背部皮下注射丙酸睪丸酮0.125mg(0.0

2、5ml)為模型組。第22日齡斷奶，同樣條件飼養(yǎng)，不加飼維生素類制品。第70日齡陰道開口，連續(xù)陰道涂片兩個性周期，陰道上皮無周期性變化，呈持續(xù)性角化，提示模型復(fù)制成功。正常對照組大鼠陰道上皮呈周期性變化。隨機將模型動物分為模型組(模型組加生理鹽水)、陽性藥對照組(模型組加烏雞白鳳口服液)及中藥治療組(模型組加補腎調(diào)經(jīng)方)。自第80日齡起，正常對照組自由飲水，其余各組每天分別灌以生理鹽水、烏雞白鳳口服液和補腎調(diào)經(jīng)方，連續(xù)60天，陰道細胞發(fā)生

3、變化，選擇同一動情周期處死大鼠。 2補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠下丘腦的影響 采用放射免疫分析方法，分別對四組大鼠的下丘腦β-內(nèi)啡肽(β-EP)的含量進行比較。 3補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠腺垂體的影響 采用放射免疫分析方法，分別對四組大鼠血清中腺垂體分泌激素卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、泌乳素(PRL)的水平進行比較。采用光鏡及電鏡對腺垂體形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)進行觀察。免疫組織化學(xué)染色觀察轉(zhuǎn)化生長因

4、子β1(TGFβ1)、轉(zhuǎn)化生長因子β1受體(TGFβRI)在腺垂體表達。 4補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠卵巢的影響 采用放射免疫分析方法，分別對四組大鼠血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)、睪酮(T)的水平進行比較。HE染色和免疫組織化學(xué)染色，觀察卵巢形態(tài)學(xué)變化及雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、TGFβ1、TGFβRI在卵巢的表達強度，并對卵巢稱濕重。 5補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠子宮的影響 采用Gri

5、ess法對四組大鼠子宮一氧化氮含量進行比較，并對子宮稱濕重。HE染色和免疫組織化學(xué)染色，觀察四組大鼠子宮形態(tài)學(xué)變化及ER、PR、TGFβ1、TGFβRI在子宮的表達強度。 結(jié)果： 1補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠下丘腦的影響 與模型組比較，正常對照組下丘腦β-EP含量明顯降低(P＜0.05)。陽性藥對照組、中藥治療組下丘腦β-EP含量無明顯變化(P＞0.05)。 2補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠腺垂體的影響

6、 2.1補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠腺垂體激素的影響 與模型組比較，正常對照組血清中FSH顯著升高(P＜0.01)，PRL含量顯著下降(P＜0.01)；陽性藥對照組血清中FSH、LH、PRL含量無明顯差異(P＞0.05)；中藥治療組血清中FSH水平顯著升高(P＜0.05)，PRL含量顯著下降(P＜0.05)，LH的水平無明顯變化(P＞0.05)。 2.2補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠腺垂體形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)的影響 模型

7、組大鼠腺垂體結(jié)構(gòu)稀疏，腺細胞數(shù)目明顯減少；電鏡顯示促性腺細胞線粒體被破壞，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)欠發(fā)達，分泌顆粒少。正常對照組大鼠腺垂體結(jié)構(gòu)清晰，血竇豐富，腺細胞密集；電鏡顯示促性腺細胞內(nèi)有豐富的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，分泌顆粒多。陽性藥對照組大鼠腺垂體結(jié)構(gòu)有所改善，腺垂體細胞數(shù)目增加，電鏡顯示腺垂體促性腺細胞內(nèi)有較多的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和分泌顆粒。中藥治療組大鼠腺垂體的結(jié)構(gòu)明顯改善；電鏡顯示腺垂體促性腺細胞內(nèi)有豐富的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及大量的分泌顆粒。 2.

8、3補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠腺垂體TGFβ1、TGFβRI表達的影響 與模型組比較，正常組、陽性藥對照組、中藥治療組腺垂體TGFβ1、TGFβRI表達明顯降低。 3補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠卵巢的影響 3.1補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠卵巢性激素影響 與模型組比較，正常對照組血清中P顯著升高(P＜0.01)，E2、T含量顯著下降(P＜0.01)；陽性藥對照組血清中E2、P、T的含量無明顯差異(P＞0.05)

9、；中藥治療組血清中E2、T含量顯著下降(P＜0.05)，P值無顯著變化(P＞0.05)。 3.2補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠卵巢形態(tài)學(xué)的影響 模型組大鼠卵巢中卵泡囊狀擴張，顆粒細胞層極薄。正常對照組大鼠卵巢可見發(fā)育期各級卵泡及大量黃體。陽性藥對照組模型大鼠卵巢的結(jié)構(gòu)有所改善，擴張卵泡的顆粒層增厚。中藥治療組模型大鼠卵巢的結(jié)構(gòu)明顯改善；卵泡發(fā)育并有典型黃體形成。 3.3補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠卵巢ER、PR的影響

10、 與模型組比較，正常對照組、中藥治療組卵巢顆粒細胞、黃體ER的表達明顯增加(P＜0.01)，陽性藥對照組黃體中ER表達明顯增加(P＜0.01)。 與模型組比較，正常對照組卵巢顆粒細胞、黃體PR的表達明顯增加(P＜0.01)，陽性藥對照組卵巢顆粒細胞、黃體中PR表達的平均灰度無明顯變化(P＞0.05)；中藥治療組卵巢顆粒細胞、黃體中PR表達的平均灰度均明顯降低(P＜0.01,P＜0.05)。 3.4補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵

11、模型大鼠卵巢TGFβ1、TGFβRI表達的影響 與模型組比較，正常對照組、陽性藥對照組、中藥治療組TGFβ1在卵巢顆粒細胞、間質(zhì)細胞中的表達明顯降低(P＜0.01)。 與模型組比較，正常對照組TGFβRI在卵巢顆粒細胞的表達明顯降低(P＜0.01)；正常對照組、陽性藥對照組、中藥治療組TGFβRI在卵巢間質(zhì)細胞中的表達明顯降低(P＜0.01)。 3.5補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠卵巢重量的影響 與模型組比較

12、，正常對照組卵巢重量明顯增加(P＜0.01)。陽性藥對照組卵巢重量無明顯變化(P＞0.05)。中藥治療組卵巢重量顯著增加(P＜0.05)。 4補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠子宮的影響 4.1補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠子宮NO含量的影響 與模型組比較，正常對照組子宮NO含量明顯增加(P＜0.05)；陽性藥對照組子宮NO含量無明顯變化；中藥治療組子宮NO含量明顯增加(P＜0.05)。 4.2補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型

13、大鼠子宮形態(tài)學(xué)的影響 模型組大鼠子宮壁肌層較其他組變薄，子宮內(nèi)膜也薄，腺體極少；正常對照組大鼠子宮內(nèi)膜厚，腺體豐富；陽性藥對照組大鼠子宮內(nèi)膜明顯增厚，腺體數(shù)目明顯增多；中藥治療組模型大鼠子宮內(nèi)膜增厚，腺體數(shù)目增多。 4.3補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠子宮ER、PR表達的影響 與模型組比較，正常對照組ER在子宮腺、間質(zhì)表達明顯增加(P＜001)；陽性藥對照組子宮ER、PR表達無明顯變化；中藥治療組ER、PR在內(nèi)膜上皮

14、、子宮腺、間質(zhì)表達明顯增加(均為P＜001)，肌層表達明顯增加(均為P＜005)。 4.4補腎調(diào)經(jīng)方對無排卵模型大鼠子宮TGFβ1、TGFβRI表達的影響 與模型組比較，正常對照組、陽性藥對照組、中藥治療組TGFβ1在子宮內(nèi)膜(腺細胞、間質(zhì)細胞)、肌層表達的平均光度值明顯增加(P＜001)。正常對照組、中藥治療組TGFβRI在子宮肌層表達的平均光度值明顯增加(P＜005)(光度值越大，表達越強)。 4.5補腎調(diào)經(jīng)

15、方對無排卵模型大鼠子宮重量的影響 與模型組比較，正常對照組子宮重量亦明顯增加(P＜0.05)；陽性藥對照組子宮重量明顯增加(P＜0.01)；中藥治療組子宮重量明顯增加(P＜0.01)。 5補腎調(diào)經(jīng)方與烏雞白鳳口服液對無排卵模型大鼠卵巢、子宮重量影響的比較 與陽性藥對照組比較，中藥治療組大鼠卵巢重量明顯增加(P＜0.05)；組織形態(tài)學(xué)觀察，卵泡顆粒層細胞明顯增厚，并見各級發(fā)育的卵泡和黃體；卵巢顆粒細胞ER、PR表達

16、明顯增強。中藥治療組卵巢顆粒細胞TGFβR1子宮肌層TGFβR1表達接近正常。而陽性藥對照組卵巢顆粒細胞TGFβR1過度表達，子宮肌層TGFβR1表達沒有明顯變化。 結(jié)論： 1補腎調(diào)經(jīng)方作用于垂體，改善垂體的結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)其內(nèi)分泌功能；促進FSH和LH分泌，降低PRL水平，解除高濃度的PRL對性腺軸的抑制作用；調(diào)整垂體TGFβ1、TGFβRI的表達，從而促進卵泡發(fā)育、顆粒細胞增生。 2補腎調(diào)經(jīng)方作用于卵巢，使卵巢ER

17、、PR表達增強，使甾體激素更充分發(fā)揮生理效應(yīng)；調(diào)整卵巢TGFβ1、TGFβRI的表達；增強卵巢的內(nèi)分泌功能，促進卵泡的發(fā)育和排卵，并使卵巢重量增加，這可能是垂體調(diào)節(jié)和補腎中藥共同作用。 3補腎調(diào)經(jīng)方作用于子宮，促進子宮內(nèi)膜發(fā)育，使子宮ER、PR表達增強，使甾體激素更充分發(fā)揮生理效應(yīng)；通過上調(diào)子宮NO含量，促進子宮內(nèi)膜血管擴張、血管通透性以及平滑肌舒張，促使內(nèi)膜肌層水腫，有利于胚泡植入和蛻膜的形成；通過上調(diào)子宮內(nèi)膜、肌層TGFβ1